2006年, 第36卷, 第4期　刊出日期：2006-08-10

  

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病原学
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  大豆疫霉菌单孢分离物生物学性状的遗传变异研究

  左豫虎, 侯巨梅, 康振生, 崔素萍, 黄丽丽

  植物病理学报. 2006, 36(4): 289-295.

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  本文研究了大豆疫霉菌单游动孢子无性分离物和自交单卵孢子分离物的菌丝生长速率、菌落形态、同宗配合性状、产孢量以及对甲霜灵敏感性的遗传变异。结果表明:菌落形态、生长速率和同宗配合性状在单游动孢子后代和自交后代可稳定遗传,控制上述性状的遗传因子是纯合的;大豆疫霉菌的游动孢子产生能力和对甲霜灵的敏感性在单游动孢子后代和自交后代中均发生连续性变异,表明这两种性状可能是数量遗传性状,也可能控制这两种性状的基因为杂合基因或细胞质遗传因子。
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  半巢式RT-PCR检测进口大豆中菜豆荚斑驳病毒的研究

  闻伟刚, 崔俊霞, 赵秀玲, 徐瑛, 陈先锋

  植物病理学报. 2006, 36(4): 296-300.

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  菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)在美国东部和南部的大豆产区广泛分布。该病毒能够造成3%~52%的产量损失并使大豆品质降低,目前我国未见其分布。针对进口大豆种子的植物病毒检测,本文建立了半巢式RT-PCR技术检测BPMV的方法。该方法采用Trizol快速提取大豆种子病毒总RNA,并根据BPMV的外壳蛋白编码基因设计特异性引物,经第一轮RT-PCR和第二轮半巢式PCR扩增,分别得到275 bp和196 bp大小的特异性基因片段。半巢式RT-PCR扩增产物的测序表明,该产物序列与BPMV的外壳蛋白编码基因存在91%~95%的高度同源性。检测灵敏度比较研究显示,DAS-ELISA与RT-PCR的检测灵敏度相近,半巢式RT-PCR的检测灵敏度比这2种方法高出103倍以上。
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  单抗I-ELISA和TAS-ELISA检测百合无症病毒的研究

  刘成科, 吴建祥, 洪健, 周雪平, 叶美琴

  植物病理学报. 2006, 36(4): 301-305.

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  以抗百合无症病毒(Lily symptom less virus,LSV)的单克隆抗体为核心,建立了间接ELISA (I-ELISA)和三抗体夹心ELISA (TAS-ELISA)的检测方法。I-ELISA检测体系中,病叶汁液和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1:20和1:6 000,对病叶汁液的检测灵敏度达到了1:2 560,可检测到提纯病毒绝对量为1.35 ng。TAS-ELISA检测体系中捕获抗体和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1:200和1:6 000,检测病叶汁液的灵敏度达到了1:5 120,对于提纯病毒可检测到0.68 ng。使用美国Agdia公司双抗体夹心ELISA (DAS-ELISA)检测试剂盒对病叶汁液的检测灵敏度为1:2 560,提纯病毒检出量1.35 ng。用3种ELISA方法检测了采自浙江省丽水市的46个田间样品,I-ELISA、TAS-ELISA和DAS-ELISA测出的阳性样品数分别为19、21和18个,阳性率为41%、46%和39%。灵敏度检测和田间样品检测结果显示,TAS-ELISA的灵敏度高于DAS-ELISA和I-ELISA。相同样品I-ELISA所测出的OD₄₀₅值和P/N值普遍高于DAS-ELISA,表明LSV单抗比多抗具有更强的特异性和更高的灵敏度。
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  辽中地区西瓜花叶病病原的分子鉴定

  陈红运, 赵文军, 程毅, 李明福, 朱水芳

  植物病理学报. 2006, 36(4): 306-309.

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  利用ELISA和RT-PCR方法对采自我国辽中地区的西瓜花叶病样品进行检测,表明其病原为黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)。将此分离物(CGMMV-Wcn)的外壳蛋白基因克隆后进行序列分析,结果表明其cp基因由486个碱基组成,编码161个氨基酸,与已报道的其它分离物一致;CGMMV-Wcn所致症状与西瓜株系(CGMMV-W)相同,且二者cp基因的氨基酸序列完全一致,因此该分离物应为CGMMV-W。
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  云南、福建、湖南烟区烟草花叶病主要病毒种类检测及黄瓜花叶病毒亚组鉴定

  刘勇, 莫笑晗, 余清, 顾钢, 黄石旺, 夏玉珍, 周雪平

  植物病理学报. 2006, 36(4): 310-313.

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  采用抗原直接包被和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)对采自云南、福建、湖南烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测,利用三抗体夹心ELISA对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亚组类型进行了鉴定。在云南采集的520个花叶病样品中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、CMV和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)总检出率分别为71.74%、55.01%和6.35%;在福建采集的150个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为94%、24.66%和8.00%;在湖南采集的74个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为58.11%、51.35%和2.70%。部分样品为2种以上病毒复合侵染。云南、福建和湖南采集的64个CMV阳性样品中,属亚组Ⅰ的样品为57个,占89.1%;属亚组Ⅱ的样品为10个,占15.6%;其中3个样品为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的复合侵染。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  嘧肽霉素抗烟草花叶病毒作用机理初步研究

  朱春玉, 吴元华, 赵秀香, 王艳红

  植物病理学报. 2006, 36(4): 314-316.

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  以烟草花叶病毒(TMV)/烟草为测试体系,用³H-尿苷和³H-亮氨酸2种同位素示踪的方法研究了4%嘧肽霉素水剂抗TMV的作用机理。通过³H-尿苷示踪实验发现:无论是叶盘法还是整株法测定,嘧肽霉素均能抑制病毒对³H-尿苷的利用,抑制率分别为72.43%和68.95%;而对寄主植物RNA合成,2种方法的抑制率分别为8.09%和11.02%。通过³H-亮氨酸示踪结果可以看出:嘧肽霉素较强地抑制了病毒对³H-亮氨酸的吸收,但能促进寄主对³H-亮氨酸的吸收。³H-尿苷和³H-亮氨酸分别是RNA和蛋白质合成的前体物,因此,嘧肽霉素通过抑制病毒RNA复制和蛋白质的合成来扰乱病毒的增殖,从而减弱病害的发生。
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  水稻纹枯病发病过程PR1和PBZ1的表达动态

  赵长江, 鲁国东, 杜晓昱, 刘丽, 林艳, 时玉君, 王宗华

  植物病理学报. 2006, 36(4): 317-321.

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  采用从福建省稻田分离纯化的纹枯病菌(Rhizoctonia solani)菌株FJ-15接种籼稻9311,分析了水稻在纹枯病菌侵染致病过程中,编码病程相关蛋白的基因表达动态,并观察了症状的变化。Northern blot分析表明:PR1在接种12 h后开始表达,在之后的4个时间段其表达量逐步增强;而PBZ1也在12 h开始表达,在48 h表达量激剧增强几乎与72 h表达量相当。组织和症状观察表明,接种12 h后叶鞘表面菌丝纵横分枝,接种36 h后出现零星病斑,接种48 h后表现典型的受害症状,接种72 h后病斑继续扩大,并可蔓延到非接种叶鞘。结果表明,PR1和PBZ1的表达与水稻和纹枯病菌亲和互作的过程存在对应关系。
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  辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)不同发育阶段对嘧菌酯的敏感性研究

  钱忠海, 陈长军, 王建新, 周明国

  植物病理学报. 2006, 36(4): 322-327.

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  细胞色素bc₁位点抑制剂包含作用于线粒体内膜外壁CoQ氧化位点抑制剂(Q_oIs)和作用于线粒体内膜内壁CoQ的还原位点抑制剂(Q_iIs)。从未使用过Q_oIs和Q_iIs的江苏省南京市和安徽省和县随机采集分离获得48个辣椒疫霉单游动孢子囊菌株,并测定了它们不同发育阶段对嘧菌酯的敏感性。结果表明,辣椒疫霉菌丝生长对嘧菌酯的敏感性最低,EC₅₀值范围在1.225~86.100 μg/mL,平均值为(21.041±14.397)μg/mL,其活性低于甲霜灵47.7倍;游动孢子囊形成和萌发对嘧菌酯的敏感性较高,EC₅₀值范围分别在0.006~0.996 μg/mL和0.053~0.334 μg/mL,平均值分别为(0.161±0.126)μg/mL和(0.155±0.023)μg/mL,其活性高于甲霜灵516.8倍;游动孢子萌发对嘧菌酯的敏感性最高,EC₅₀值范围在(0.018~0.111)μg/mL,平均值为(0.057±0.011)μg/mL,活性是甲霜灵的142.4倍。离体生物测定结果表明,水杨肟酸对嘧菌酯抑制菌丝生长的增效作用最强,对游动孢子囊形成的增效作用次之,而对游动孢子囊和游动孢子萌发过程的增效作用则不明显。
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  稻瘟菌Rho族蛋白及其编码基因表达特点

  郑武, 陈继圣, 郑士琴, 刘丽华, 刘淑集, 鲁国东, 周洁, 王宗华

  植物病理学报. 2006, 36(4): 328-336.

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  Rho族蛋白是Ras超家族小G蛋白最主要成员,在真核生物中极为保守,包括Rho、Rac、Cdc42等,作为分子开关,参与细胞极性、细胞运动、细胞形状、细胞间及细胞与其基质互作等多个信号转导途径。基因组数据库分析显示,稻瘟菌中含有30余个小G蛋白,其中7个可能是Rho族蛋白,包括Cdc42、Rac1及5个Rho亚家族蛋白。结构分析表明,7个推导的Rho族蛋白均具有典型结构域。进一步以半定量RT-PCR分析了稻瘟菌7个Rho族蛋白编码基因在菌丝、分生孢子、芽管以及附着胞等不同生长发育阶段的表达情况。结果表明,Rho族蛋白编码基因具有不同的表达模式。通过BLASTP搜索GenBank等数据库,获得迄今已公布的真菌Rho1、Cdc42和Rac1蛋白序列,建立了系统发育树,一定程度地反映了真菌进化关系,说明在真菌进化中Rho族蛋白的结构与功能也经历了共同演化的过程。
致病性与抗病性遗传
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  采用AFLP技术分析稻曲病菌的遗传多样性Ⅰ:同一块稻田中稻曲病菌的遗传结构

  潘雅姣, 樊金娟, 付彬英, 王洁, 徐建龙, 陈红漫, 黎志康, 周永力

  植物病理学报. 2006, 36(4): 337-341.

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  采用AFLP (Amplified fragment length polymorphism)技术分析了来自北京昌平同一块稻田中不同水稻品种和育种中间材料上稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的遗传多样性。从256对EcoRⅠ和MseⅠ引物中选择30对扩增40个菌株。结果表明,同一块稻田中稻曲病菌菌株间的相似性系数达0.72以上,来自同一小区的多数菌株能聚成亚类;发现从同一水稻品种分离的菌株没有特异性的AFLP谱带。初步推断稻曲病菌与水稻品种不存在明显的专化性互作。
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  小麦材料PI31抗条锈性鉴定及其抗性基因SSR标记

  蒲宗君, 颜泽洪, 魏育明, 杨武云, 郑有良, 张增艳

  植物病理学报. 2006, 36(4): 342-346.

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  小麦材料PI31对我国当前流行的条锈菌小种条中30、31和32免疫;遗传分析表明,PI31携带一个显性抗条锈病基因。等位性测定显示,PI31所携带的抗条锈病基因与已知抗锈基因Yr5、Yr10和Yr15不等位。抗源系谱分析表明,该基因来源于叙利亚普通小麦品系叙18;故将此材料携带的抗条锈病基因暂定名为Yr-XU。利用分组分析(BSA)法,筛选到1个位于1 BS的SSR标记WM S11-193 bp片段与Yr-XU紧密连锁,将Yr-XU定位于小麦1BS上;对F₂分离群体142个单株分析结果表明,Yr-XU与WM S11-193 bp的遗传距离为2.1 cM,可将此标记用于小麦抗条锈病分子标记辅助育种。
植物病害及其防治
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  内生菌螺旋毛壳抗生素和水解酶的协同抗真菌作用

  高克祥, 庞延东, 秦乃花, 刘晓光, 康振生

  植物病理学报. 2006, 36(4): 347-358.

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  生防因子螺旋毛壳(Chaetomium spirale) ND35生长于含立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)菌丝细胞壁制备物的SM培养基中,从培养滤液提取的粗酶液强烈抑制Valsa sordida、Valsa mali、Glomerella cingulata和Curvulavia lunata病原真菌的菌丝生长和孢子萌发。经DNS法检测,粗酶液同时具有β-1,3-葡聚糖酶(包括内切和外切酶)和几丁质酶活性,分别为0.19 U.mg-1和0.09 U.mg-1。生长于3%玉米粉浸渍液的螺旋毛壳ND35的培养滤液也能抑制上述病原菌的菌丝生长和孢子萌发。离体条件下检测了ND35产生的一纯化的具有分子量为73 kD的内切β-1,3-葡聚糖酶(GLUC73)和一纯化的抗生素对苹果炭疽病菌的分生孢子萌发和芽管延长的抑制效果。当内切β-1,3-葡聚糖酶使用浓度为180 μg·mL^-1时,抑制了测试真菌的孢子萌发,造成细胞壁的改变,导致了菌丝顶端的破裂;抗生素的有效抑菌中浓度ED₅₀为1.75 μg·mL^-1。单独应用时,1.0 μg·mL^-1的抗生素或40 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶没有或仅有很低的抑菌效果;两者组合导致孢子萌发约78%受抑制。甚至10 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶也使1.5 μg·mL^-1抗生素的抑菌作用从低于25%增加到超过50%的抑菌效果。此外,80 μg·mL^-1的内切β-1,3-葡聚糖酶使1.0 μg·mL^-1抗生素的抑菌活性从0%提高到90%。抗生素和β-1,3-葡聚糖酶的协同抗菌活性可能在内生菌螺旋毛壳的植病生防中起重要作用。
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  系统侵染的番茄植株中黄瓜花叶病毒的时序变化

  傅天珍, 高永生, 陈集双

  植物病理学报. 2006, 36(4): 359-365.

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  采用实时荧光定量PCR (FQ-PCR)和DAS-ELISA方法,研究了22~26℃温室条件下番茄幼苗中黄瓜花叶病毒CNA株系(CMV-CNA)各基因组RNA组分及其外壳蛋白(CP)含量的动态变化,同时结合同期感病植株症状发展和病情指数,分析并探讨CMV各基因组RNA、CP以及病症显示程度之间的时间效应及其相关性。以18S rRNA为内参照,FQ-PCR相对定量分析结果显示:接种后5~30 d,CMV三分体基因组RNA在系统侵染的番茄组织中负荷量变化趋势大体一致,但是不同时期含量差异显著,均经历对数增长期、稳定期和回落期。其中,以RNA2负荷量变化情况最为平缓。DAS-ELISA检测结果显示:CP含量随接种时间延长而持续升高,但其对数增长趋势相对滞后于基因组RNA。番茄幼苗发病症状与CMV基因组RNA及CP负荷量的变化趋势大体一致,但症状表现时间相对滞后。CMV-CNA株系在番茄幼苗中以基因组RNA、CP以及病症显示先后次序出现高峰期,显示病毒基因组RNA及其CP在植物组织内负荷量的变化与植株症状表现并不同步。其动态变化规律将为研究CMV侵染机制,病毒与寄主互作及防病控病提供量化依据。
研究简报
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  2个海洋生境微生物菌株产生的次生代谢产物协同抗菌作用初探

  田黎, 张久明, 孙照斌, 陈靠山, 周俊英

  植物病理学报. 2006, 36(4): 366-368.

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  海洋微生物由于其资源优势是目前海洋生物开发利用研究的热点,其代谢产物的抑菌作用是目前研究较集中的领域,不少报道证明,海洋微生物能产生活性高、结构新颖的次生代谢产物^[1,2]。但海洋微生物产生的次生代谢产物在菌株发酵液中含量少,导致直接利用的抗菌物质效价较低,而其原始生境的寡营养,又较难通过营养条件改善来提高抑菌活性,影响了后续的研究工作,这是目前海洋微生物开发利用急待解决的问题。本课题组将通过离体抑菌测试和植物活体测试筛选出2个海洋微生物菌株,在菌株单独发酵条件优化的基础上,对2个菌株的协同作用进行了探索性的研究。
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  海里康叶枯病及病原鉴定

  王建光, 杨丽霞, 关鼎儒, 孔宝华, 刘云龙, 范静华

  植物病理学报. 2006, 36(4): 369-371.

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  海里康(Heliconia stricta cv. Dwarf Jamaican)属于芭蕉科蝎尾蕉属,是原产热带美洲的草本植物,该属包括200多个种^[1]。海里康花形独特,花色鲜艳,颇受消费者欢迎,是夏威夷花卉生产的一个新兴产业。近年来,随着我国花卉产业的迅速发展,有必要在传统花卉种类的基础上,拓宽生产的种类和品种。2004年云南省元江县引进5个海里康品种,示范面积达6.67 hm²。调查发现,种植的海里康植株叶片出现大量枯斑,甚至整个叶片枯萎、破烂。为此对病害症状及发病状况进行了调查,对病原物进行了分离、培养、鉴定,以期为病害的有效防治提供依据。
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  西洋参滑刃线虫属Aphelenchoides 4个种的分类鉴定

  武侠, 刘维志

  植物病理学报. 2006, 36(4): 372-374.

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  西洋参（Panax quinquefolium L．）原产北美洲，1978年引入我国并试种成功。西洋参作为一种名贵中药材，是我国中医药及医药保健品的重要成分之一，同时也是中草药栽培的主要品种之一。随着种植面积和种植区域的扩大，西洋参根部病害在生产上具有逐年加重的趋势，严重制约了西洋参产业的发展。在真菌和细菌病原物引致根病中，根际的植物寄生线虫往往是复合侵染的重要因子之一。
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  福建省香蕉枯萎病菌硝酸盐营养突变体的营养体亲和性测定

  叶明珍, 张绍升

  植物病理学报. 2006, 36(4): 375-377.

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  Fourteen strains of Fusarium oxysporum f. sp. cubense were induced to produce 146 nitrate-nonutilizing(nit) mutants on a chlorate-containing medium. Among them, there were 117 nit1 mutants(80.14%), 17 nit3 mutants(11.64%) and 12 nitM mutants(8.22%). These strains were divided into two vegetative compatibility groups(VCGs) by the vegetative compatibility tests. Twelve strains of F. oxysporum f. sp. cubense from Musa AAA belonged to VCG1, two trains from Musa ABB belonged to VCG2.
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  甘蔗花叶病毒福建分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析

  姚伟, 段真珍, 周会, 何正权, 张木清, 陈如凯

  植物病理学报. 2006, 36(4): 378-381.

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  A fujian isolate of Sugarcane mosaic virus named SCMV-FJ was isolated from infected sugarcane. Cloning and sequence analysis of the coat protein gene of this isolate was carried out. A pair of primers was designed and synthesized based on the nucleotide sequences of coat protein genes of sugarcane mosaic viruses reported. The coat protein gene of SCMV-FJ was amplified from the extracted total RNA of the infected sugarcane by using RT-PCR, and cloned into the pMD18-T vector. The sequencing result indicated that the cloned segment included a 1137 bp open reading frame(ORF) and a 228 bp 3' untranslated region, in which the ORF comprised the whole coat protein and part of the nuclear inclusion b. The nucleotide and the deduced amino acid sequences of the coat protein gene were compared with those of the other isolates or strains of SCMV subgroup reported in GenBank. The result showed that it shares 56.8%-97.1% and 55.3%-99.4% homology in nucleotide and the putative amino acid sequences, respectively, with the highest amino acid homology of 99.4% with SCMV-D. Thus it was identified as a SCMV-D. This experiment provided a rapid, sensitive and relatively inexpensive method for RT-PCR detection of SCMV. At the same time, the cloning of SCMV-FJ coat protein gene provided the foundation for plant gene engineering against SCMV.
简评
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  关于植物病原生物名称汉译的几点意见

  许志刚, 张中义, 张天宇, 刘维志, 曹若彬, 李怀方, 周而勋

  植物病理学报. 2006, 36(4): 382-384.

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  Many plant pathogens have their scientific names after being identified. Most of them have their Chinese names which being given or translated by Chinese scientists correctly. But, some of them were not correct or standard, or have the same Chinese names. Such as Apiosporium and Pyricularia;Colletogloeum and Myxosporium;Aureobasidium and Napicladium, etc. A few genus names have changed several times since new taxonomy system being published, for example, the pathogen of tomato bacterial wilt pathogen has 4 genus names, Bacterium, Pseudomonas, Burkholderia, and Ralstonia, the Ralstonia is valuable and updated. The term of MLO has been used not longer, and the "Candidatus Phytoplasma" is adopted now.
  "The Latin-Chinese and Chinese-Latin Names of Plant Pathogens" is publishing, which is edited and contributed by seven professors engaged in education and plant protection in China. Main target of the book is(trying) to make unification when Chinese name of pathogen is used.