2007年, 第37卷, 第3期　刊出日期：2007-06-10

  

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病原学
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  西瓜细菌性果斑病菌的16S rDNA序列分析及特异性引物的设计

  张祥林, 伍永明, 王翀, 李碧佳

  植物病理学报. 2007, 37(3): 225-231.

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  利用细菌16S rDNA基因的通用引物对16个供试菌株进行PCR扩增,把扩增产物进行核苷酸序列测定。将获得的序列与GenBank中相关菌株的16S rDNA序列进行同源性分析。以此设计出检测A.a.c的特异性引物,并利用最大简约法构建了16S rDNA系统演化树。系统演化关系分析表明,6~9号供试菌株的16S rDNA序列与A.a.c标准菌株仅有3个位点的差异,其同源性均在99.8%以上,在构建的系统演化树上,它们聚为同一个族群。利用设计的一对特异性引物(BFB64/65),对各供试菌株进行PCR检测,结果只有A.a.c相关菌株产生扩增条带,产物大小与预期一致。
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  香料烟细菌性斑点病病原鉴定

  姬广海, 方敦煌, 殷端, 李光西, 杜绍明

  植物病理学报. 2007, 37(3): 232-236.

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  2004~2005年在云南保山香料烟上发现一种由细菌侵染引起的新病害,称为香料烟细菌斑点病。该病主要危害叶片,初为黑褐色水浸状圆形或多角形小斑点,以后病斑扩大、连片,形成不规则的较大坏死斑。从病叶上分离到了28株细菌菌株,菌株接种于香料烟上,发病症状与田间自然症状一致,并从回接病株上重新分离得到此病病原细菌。经过革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、LOPAT试验、生理生化特性分析和16S-23S rDNA序列分析,以及病原菌寄主范围测定,确定该病原菌为丁香假单胞菌烟草致病变种[Pseudomonas syringae pv. tabaci(Wolfet al.)Young et al.]。
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  一种侵染滇重楼的Potexvirus病毒分离物分子鉴定及其3'末端序列分析

  董家红, 丁铭, 方琦, 罗延青, 张仲凯, 李展, 杨斌, 李晓明

  植物病理学报. 2007, 37(3): 237-241.

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  从云南武定的滇重楼上得到一个病毒分离物Paris-YN,病毒粒体为弯曲线状。利用RT-PCR扩增获得一条1074bp的片段,序列比较分析发现其与马铃薯X病毒属(Potexvirus)病毒3'末端的结构最为相似,且与属内的白三叶草花叶病毒等20个不同分离物3'末端有36.7%~58.9%的同源性;该病毒cp基因长639个核苷酸,编码212个氨基酸(22.8kDa),与20个Potexvirus病毒分离物的CP氨基酸序列比较发现,Paris-YN与白三叶草花叶病毒的CP氨基酸同源性最高(60.1%)。证据表明,该分离物可能为Potexvirus的新成员,暂命名为重楼X病毒(Paris polyphylla virus X)。
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  云南甘蔗花叶病病原检测及一个分离物的分子鉴定

  李文凤, 董家红, 丁铭, 方琦, 黄应昆, 苏晓霞, 李婷婷, 罗延青, 张仲凯

  植物病理学报. 2007, 37(3): 242-247.

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  调查表明甘蔗花叶病在云南发生普遍。电镜检测采自云南6个蔗区主栽品种上的28个甘蔗花叶病病样(分离物),其中25个病样的病叶汁液中观察到弯曲线状的病毒粒体,病叶组织中有风轮状和卷筒状内含体;对这25个分离物进行间接ELISA检测,16个与马铃薯Y病毒属抗血清呈阳性反应,其余呈阴性反应。根据蔗区及其主栽品种的不同,挑选7个分离物进行鉴别寄主测定,结果显示不同分离物鉴别寄主范围和致病性存在明显差异,分离物HH-1有范围最广的鉴别寄主和较强的致病性。克隆并测定HH-1基因组3'末端序列,序列分析发现HH-1的外壳蛋白(CP)基因共864个核苷酸,编码287个氨基酸,与高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)余杭分离物CP氨基酸序列的同源性最高,为97.7%;因此推定HH-1属于SrMV的一个新分离物。
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  香蕉黑腐病菌(Botryodiplodia theobromae)的PCR检测

  郭立佳, 黄俊生, 王国芬, 邓国平, 杨腊英

  植物病理学报. 2007, 37(3): 248-254.

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  根据香蕉黑腐病菌可可球二孢菌(Botryodiplodia theobromae)与其它香蕉病原真菌核糖体基因转录间隔区(rDNA-ITS)ITS1和ITS2间序列差异,设计了特异引物Bth-S(5'-TCTCCCACCCTTTGTGAAC-3')和Bth-A(5'-AAAAGT-TCAGAAGGTTCGTC-3'),利用此引物对包括可可球二孢菌在内的21个菌株基因组DNA进行PCR扩增,结果只有4个可可球二孢菌菌株扩增到422bp特异带,其它17个菌株无扩增产物。灵敏度测试结果表明此特异引物能对1pg的可可球二孢菌基因组DNA进行扩增。对自然感染黑腐病的香蕉果实组织和接种可可球二孢菌或多种香蕉病原真菌混合接种的果实组织进行检测,Bth-S和Bth-A引物对不仅能够在自然感染黑腐病果实组织中特异检测到可可球二孢菌,而且能在未显症和发病的接菌香蕉果实组织中特异检测得到可可球二孢菌。这为香蕉可可球二孢菌潜伏侵染检测提供了技术支持。
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  甘薯潜隐病毒外壳蛋白基因的克隆、表达及其抗血清的制备

  黄玉娜, 张振臣

  植物病理学报. 2007, 37(3): 255-259.

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  根据已报道的甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus,SPLV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR方法克隆了SPLV河南分离物(SPLV-HN)的CP基因及部分3'端非编码区序列,序列分析表明,SPLV-HN CP基因由879个核苷酸组成(GenBank登录号为DQ399862),编码293个氨基酸残基。与GenBank中SPLV-CH(X84011)和SPLV-T(X84012)分离物的核苷酸序列相似性分别为96.8%和93.0%;与日本分离物(E15420)的核苷酸序列相似性为83.6%。将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了SPLV外壳蛋白的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甘薯样品的检测。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究

  纪兆林, 唐丽娟, 张清霞, 徐敬友, 陈夕军, 童蕴慧

  植物病理学报. 2007, 37(3): 260-264.

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  地衣芽孢杆菌W10是一株对多种植物病原菌有拮抗作用的生防细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。细菌培养滤液用30%硫酸铵盐析,透析后再经SephadexG-75层析柱纯化得到一种具有抑菌活性的蛋白。该抗菌蛋白的分子量为46049.2Da;等电点为6.71;含有糖基,含糖量为6.83%;含有脯氨酸或羟脯氨酸;不含脂基。这种蛋白在pH6~12范围内均具有抑菌作用,pH6时活性最大;对热稳定,100℃以下水浴20min,抑菌活性与对照相比均在对照的80%以上,121℃蒸汽处理20min,活性虽有所下降,但仍达对照的65.7%;对胰蛋白酶和蛋白酶K不敏感,酶处理后蛋白的抑菌活性分别为对照的98.7%和98.3%;对氯仿和紫外线也不敏感,处理后活性仍达对照的91.0%和98.6%。
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  条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库构建及表达序列标签分析

  马金彪, 王晓杰, 于秀梅, 徐亮胜, 韩青梅, 黄丽丽, 康振生

  植物病理学报. 2007, 37(3): 265-270.

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  以小麦品种水源11和条锈菌CY31号小种为材料,用SMARTTMcDNA Library Construction Kit构建条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库。得到原始文库的滴度为6×10⁶pfu/mL,扩增文库滴度9×10⁹pfu/mL,重组率98%,插入片段在0.5~2.2kb。随机挑取600个克隆,测序获得594条高质量ESTs,与GenBank序列进行BLASTx分析,已知功能ESTs与植物同源比例最高,占44%;其次为真菌,占32%;有18%ESTs在GenBank中没有匹配的同源产物。蛋白功能分析表明,PIG28编码蛋白、ABC转运子、金属硫因、泛素、质膜H⁺-ATPase和氨基酸透酶等可能参与了寄主与病原菌互作过程。
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  β-氨基丁酸诱导烟草产生PR蛋白及对TMV的抑制作用

  何永明, 丁秀英, 丛林晔, 郭光, 陈淑君, 张军

  植物病理学报. 2007, 37(3): 271-277.

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  本文研究了β-氨基丁酸(BABA)诱导系统侵染寄主烟草NC89产生PR蛋白及其对TMV的抑制作用。用5mmol/LBABA对抗性烟和非抗性烟进行叶面喷施处理均可以抑制烟草叶片中TMV的产生,平均抑制率分别达到59%和49%。BABA和SA处理均可以诱导2种烟草叶片中PR1、PR2和PR5基因的表达,其中对PR1的诱导作用相对较强。分别用BABA和SA处理非抗性烟草,在处理后的不同时间内2种药剂对PR1基因的诱导规律基本相同。用BABA和SA分别预处理非抗性烟草2d后接种TMV,2种药剂对烟草叶片中PR1基因的影响是完全不同的,其中,BABA处理后接种TMV抑制PR1基因的表达,在接种后第72h已经检测不到PR1基因的存在,SA处理后接种TMV对PR1基因的影响呈现弱-强-弱的变化趋势,在接种后第24hPR1的表达量达到最强,以后逐渐减弱。试验结果表明:BABA能够提高非抗性烟草对TMV的抗性,但是BABA诱导烟草产生抗TMV的作用机制可能是一种不同于目前普遍公认的SA的作用机制。
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  疫霉31kDa激发子的分离纯化及其诱导烟草细胞死亡机理的初步研究

  詹海燕, 薛惠明, 潘娟, 梁五生

  植物病理学报. 2007, 37(3): 278-283.

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  通过沸水浴、硫酸铵沉淀、非变性电泳、割胶电洗脱等方法,从一种疫霉的培养液中分离得到分子量约31kDa的蛋白类激发子。该激发子在低浓度下即可诱发烟草叶片发生过敏反应,处理烟草悬浮细胞12h能导致24.6%的细胞死亡,处理24h后细胞的死亡率达67.8%。用该激发子处理烟草悬浮细胞24h后细胞基因组受到明显降解,但无DNAlad-dering现象。用该激发子处理1h即可显著降低烟草悬浮细胞中的ATP水平,而用氧化磷酸化的解偶联剂CCCP处理在降低胞内ATP水平的同时也能显著诱导烟草悬浮细胞死亡,因此抑制胞内ATP合成可能是该激发子诱导烟草细胞死亡的重要机制之一。
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  siRNA对烟草原生质体中TMV RNA积累的干扰作用研究(英文)

  赵明敏, 杨向东, 鲁红学, 张长青

  植物病理学报. 2007, 37(3): 284-288.

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  RNA干扰被认为是转录后基因沉默的一种机制。RNA干扰通过小干扰RNA特异性降解目标mRNA来沉默基因表达。本文以烟草花叶病毒126kD蛋白为靶蛋白,在原生质体水平上研究了小干扰RNA对病毒侵染的干扰和抑制作用。ELISA和Northern杂交的实验结果表明,共转染小干扰RNA和TMV的原生质体内检测到较低的病毒含量。在枯斑寄主上,叶片接种小干扰RNA和TMV共转染原生质体后,与对照叶片相比,仅有很少量的病斑产生。这说明,小干扰RNA能够在原生质体水平对病毒起到干扰和抑制作用。因此认为,烟草原生质体系统有利于快速和定量分析小干扰RNA介导对植物病毒的抑制作用。
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  旁路氧化作用对嘧菌酯抑制辣椒炭疽菌孢子萌发和菌丝生长的影响

  金丽华, 陈长军, 王建新, 陈雨, 周明国

  植物病理学报. 2007, 37(3): 289-295.

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  研究表明,旁路氧化作用能够降低辣椒炭疽菌对嘧菌酯的敏感性。离体培养条件下,旁路氧化在辣椒炭疽菌野生菌株的孢子萌发中提供大于95倍生理功能的补偿作用;在菌丝生长中提供20~35倍的补偿作用。但在接种前用嘧菌酯处理辣椒,旁路氧化作用并不明显,嘧菌酯对辣椒炭疽病有良好的保护、治疗、铲除和抗产孢作用。用嘧菌酯处理过的病斑产生的分生孢子萌发活力和致病力下降。炭疽菌离体下的菌丝耗氧率测定表明,10μg/mL嘧菌酯处理1 h对菌丝呼吸耗氧有良好的抑制作用,其抑制效果随药剂浓度提高而略有增加。随处理时间延长,药剂对菌丝耗氧的抑制作用下降,但仍然抑制菌丝生长。研究证明:延长处理时间,呼吸作用对药剂的敏感性下降的机理不是因为旁路氧化途径增强,也不是因为基质中药剂效力的下降,而是存在其它机制。
植物病害及其防治
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  植物源病毒抑制剂VFB诱导烟草抗烟草花叶病毒机理的初步研究

  马志卿, 殷培军, 郭志波, 李广泽, 张兴

  植物病理学报. 2007, 37(3): 296-300.

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  为揭示植物源病毒抑制剂VFB的抗病毒机理,本研究以VFB对烟草花叶病毒(TMV)进行预防和治疗处理,测定了烟草中与抗病毒性相关的部分生理生化指标的变化。结果表明:VFB的2种处理方式均可使普通烟体内的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、总酚及类黄酮含量升高,使普通烟体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性增强,预防处理优于治疗处理。可见,VFB可诱导植物产生抗病性,增强烟草对TMV侵染的抵抗力。
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  烟草内生短短芽孢杆菌的分离鉴定及对烟草青枯病的防效

  易有金, 尹华群, 罗宽, 刘学端, 刘二明

  植物病理学报. 2007, 37(3): 301-306.

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  在烟草青枯病区采取健康烟草植株,从其茎杆内分离到2株对烟草青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacarum)有强拮抗作用的内生菌株009和011。形态观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列比对结果表明,菌株009和011均归属为Brevi-bacillus brevis,009、011菌株与B. brevis(AY591911)相似性分别为99.5%和99.0%,GenBank登录号分别为DQ444284、DQ444285。生长特性研究结果表明,它们的最适生长pH值分别为6.5、7.5,最适生长温度分别为25、30℃。温室内用淋根法分别先接种009和011菌株,后接种病原菌,其防效分别为87.25%和52.30%。用009和011菌液分别和烟草青枯病菌的混合液淋根,其防效明显低于前者。田间小区试验结果表明,011菌株的防效明显高于009菌株和农用链霉素。
研究简报
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  利用移动式孢子捕捉器捕获的孢子量估计小麦白粉病田间病情

  周益林, 段霞瑜, 程登发

  植物病理学报. 2007, 37(3): 307-309.

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  Experiments were conducted by using RAM Air Sampler for Use with Moving Vehicle to estimate field disease severity of wheat powdery mildew during 2002-2005. Results showed that there was significant correlation between field disease index and trapped spore number. Therefore, two models relating field disease index to spore number trapped were constructed using data from 2002 and 2005, or 2003 and 2004, respectively. These two models can be used to estimate field disease indexes of wheat powdery mildew in different years when disease severity is different.
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  穿山龙黑斑病病原菌鉴定及其生物学研究

  周如军, 傅俊范, 严雪瑞, 白静, 蒋有财

  植物病理学报. 2007, 37(3): 310-313.

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  In recent years, Yam black spot caused by Alternaria dioscoreae Vasant Rao became more prevalent throughout the hill yam growing area in the east part of Liaoning province, China. Study of biological characteristics of the pathogen showed that the optimal temperature and pH for its colony growth were 25-30℃ and 6-8 respectively; the optimal temperature, RH, pH and carbon source for conidium germination were 20-25℃,100%,6-7 and saccharose respectively. The conidium lethal temperature was 48℃.
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  具杀线虫活性的苏云金杆菌筛选研究

  罗兰, 谢丙炎, 杨宇红, 冯兰香, 杨之为

  植物病理学报. 2007, 37(3): 314-316.

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  Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates to B. xylophilus showed the action of exotoxin higher than that of endotoxin.
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  小麦LRR类抗病相关基因及其cDNA 3'末端的克隆与分析

  王海燕, 杨文香, 张汀, 刘大群

  植物病理学报. 2007, 37(3): 317-320.

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  Degenerated primer was designed based on the amino acid conserved regions of the reported plant disease resistance gene which encode leucine-rich repeats (LRR). A resistance gene analog (RGA) named LRR1 was obtained from the RNA of TcLr35 carrying Lr35 gene conferring resistance against wheat leaf rust by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The fragment had an open reading frame (ORF) and the nucleotide sequence containing 215 bp in length that coded 58 amino acids. 3'RACE was carried out with gene specific primers designed based on LRR1 and 3'universal primer provided in the kit. An amplified fragment of 567 bp in length which overlapped with the known LRR1 sequence by 184 bp was obtained. Finally, a fragment of 598 bp containing the sequence of LRR1 except the 5'cDNA end was obtained.
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  根结线虫在中国的新纪录种——西班牙根结线虫(Meloidogyne hispanica Hirschmann)

  王暄, 李红梅, 胡永坚, 徐建华

  植物病理学报. 2007, 37(3): 321-324.

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  A root-knot nematode, Meloidogyne hispanica Hirschmann, was first described and illustrated from roots of papaya in Danzhou, Hainan province in China. The perineal pattern of female was characterized by oval shaped to rectangular with a low dorsal arch; dorsal striae varied from fine and wavy to coarse; lateral lines forked with fringe-like striae between lines and phasmidial ducts distinctly appeared. Male had high and rounded head region with labial disc and medial lips fused to form elongate lip structures. Second-stage juve-nile had distinct body annules and stylet with rounded, posteriorly sloping knobs, and the tail terminus was slender with indistinct hyaline. This Chinese new record of M. hispanica had a unique esterase phenotype (S2-M1) which was different from that of other Meloidogyne species.
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  丛枝菌根真菌Glomus mosseae单寄主培养体系的建立

  肖翔, 王玉娟, 刘竞男, 王军, 吴跃进, 余增亮, 吴李君

  植物病理学报. 2007, 37(3): 325-328.

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  By using transformed Ri T-DNA carrot roots as host, the monoxenic culture of Glomus mosseae was successfully established. Some morphological processes of germination, colonization and spore formation, as well as bi-directional movement of hyphal cytoplasm flow were observed in this system.
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  小麦抗白粉病基因Pm6的微卫星标记鉴定

  王俊美, 刘红彦, 王飞, 康振生, 段双科

  植物病理学报. 2007, 37(3): 329-332.

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  Wheat powdery mildew, caused by Blumeria graminis f. sp. tritici, is a prevalent disease worldwide. Breeding and planting resistance cultivars have been proved effective and environmental friendly for control of the disease. To develop easily used PCR-based markers in marker assisted selection (MAS) for Pm6, a dominant powdery mildew resistance gene in wheat, 25 microsatellite markers on chromosome 2BL in wheat were screened between susceptible parent Yumai13 and resistance parent Timgalen carrying Pm6. F₂ population derived from Yumai13 and Timgalen was further analyzed by the marker Xgwm501. The results indicated that Xgwm501 was a co-dominant marker linked to Pm6 gene at a distance of 14.8 cM. 29 Pm-carrying varieties were tested by the marker Xgwm501 and only those carrying Pm6 showed 117 bp resistance specific band. This marker is proved to have high practicability and can be used in MAS of Pm6 gene in wheat breeding programs.
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  广西黑皮冬瓜疫病的病原菌鉴定及其生物学特性

  李卫民, 晏卫红, 黄思良, 陆少峰, 陈景成, 岑贞陆, 付岗

  植物病理学报. 2007, 37(3): 333-336.

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  Isolate PD1 of Phytophthora was isolated from diseased black pericarp wax gourd in Guangxi in 2005. The morphological and biological characters of the isolate were examined, and its sequence of ribosomal DNA-ITS was analyzed. The range of growth temperature of the isolate was 10-37℃ and the optimal one was 31℃. The pathogen was sensitive to 10 mg/kg of malachite green, and its ability for starch utilization was weak. A wide host range of the pathogen was confirmed by artificial inoculation. The sizes of sporangia were (37.5-71.7) μm×(20.8-47.5) μm (av. 55.0 μm×30.4 μm). Microcycle conidiation of the pathogen was observed. The pathogen was identified as Phytophthora drechsleri Tucker based on its morphological and biological characters as well as ribosomal DNA-ITS sequence.