2007年, 第37卷, 第4期　刊出日期：2007-08-10

  

• 全选
  |

病原学
• Select
  半夏细菌性软腐病原菌的分离及鉴定

  何煜波, 胡秀芳, 陈海敏, 陈集双, 高必达, 应飞翔

  植物病理学报. 2007, 37(4): 337-342.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  在浙江省人工栽培的半夏[Pinellia ternata(Thunb.) Breit.]上发现一种新的软腐病害,软腐症状常常表现在块茎上,高温高湿条件可导致叶面腐烂和整株死亡。为了对病原菌进行鉴定,从软腐的半夏病株块茎中分离到10个菌株,分别指定为RF1~RF10,并进行了致病性测定、形态观察和细菌学特性分析,同时对RF1菌株进行了分子鉴定。结果表明,10个菌株均可经人工接种导致半夏、胡萝卜、马铃薯、番茄、黄瓜和白菜软腐。在电镜下菌体呈短杆状,两端钝圆,具有4~6根周生鞭毛。兼性厌氧、革兰氏阴性,DNA中G+C mol%为51。RF1菌株的16S rDNA测序和系统发育学分析表明,其与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)M1菌株报告的序列相同点为99%,与该亚种另2个菌株(E161和441)的序列相同点达97%。结果表明,半夏软腐病原菌应归属于胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种。
• Select
  陕西苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.)不同分离株的生物学特性与致病性研究

  臧睿, 黄丽丽, 康振生, 王旭丽

  植物病理学报. 2007, 37(4): 343-351.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  本研究从陕西分离得到61株苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.),选取在PDA培养基上菌落特征差异明显的7个分离株,对其生物学特性及致病性进行研究。结果表明:各分离株在PDA、PSA、PMA和PEMA培养基上菌落生长较好,但在PDA上的菌落颜色和产孢情况差异很大。各分离株均能在5~32℃生长,但对35℃以上高温的适应性差异较大;所有分离株均能在pH4~9的条件下生长,最适pH为5~6;光照对各分离株的菌落生长有明显的促进作用。各分离株均可在Cza-pek培养基及供试的其它碳、氮源培养基上生长,其中以葡萄糖、麦芽糖和酵母膏为最佳碳、氮源。采用烫伤接种的方法,分别以菌饼和分生孢子悬浮液接种苹果离体枝条,两者均可侵染发病,但各分离株致病力差异显著,其中菌落颜色为黄褐色的菌株致病性强。因此,根据菌落颜色、致病性和生物学特性可将这7个分离株划分为3个类群:Ⅰ型为黄褐色强致病类群,但各分离株的产孢量有差异;Ⅱ型为乳白色不产孢的弱致病类群;Ⅲ型为灰褐色易产孢弱致病类群。其余54株分离物均属于Ⅰ型,这些结果说明陕西省苹果树腐烂病菌具有多样性和致病性分化现象。
• Select
  应用基因芯片检测烟草脆裂病毒

  马新颖, 汪琳, 任鲁风, 邓丛良, 高文娜, 汪万春, 周琦

  植物病理学报. 2007, 37(4): 352-355.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Total RNA in tulips was extracted by Trizol method. Primers were designed according to the sequences of Tobacco rattle virus and 18S rRNA gene of plant. The corresponding sections were amplified by RT-PCR and the PCR products were labeled by Cy3-dCTP. The probes of plant virus, 18S rRNA gene and comparisons were designed and immobilized on chips. Labeled PCR products were hybridized with the probes and the signals were scanned by scanner and analyzed by GenePix Pro 4.0 software. Tobacco rattle virus was detected from tulips which were imported from Holand. The accuracy and sensitivity of the plant virus gene chip were proved.
• Select
  来源于桃和苹果的苹果褪绿叶斑病毒的部分分子生物学特性和cp基因的原核表达

  郑银英, 王国平, 洪霓, 宋艳苏, 游红

  植物病理学报. 2007, 37(4): 356-361.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%。将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%。将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46kDa。Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性。
• Select
  紫花苜蓿丛枝病植原体的分子检测及鉴定

  刘涛, 蔡红, 赵丹, 陈海如

  植物病理学报. 2007, 37(4): 362-367.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  利用植原体16S rRNA基因通用引物对云南昆明发生的苜蓿丛枝病感病植株总DNA进行巢式PCR扩增,得到1.2kb的特异片段,从分子水平证实了苜蓿丛枝病的病原是植原体。从PCR产物的RFLP酶切图谱可看出,该植原体株系的酶切图谱与马里兰翠菊黄化植原体(AY1)相同。对扩增片段进行克隆及序列测定后,利用最小进化法做Bootstrap验证的系统进化树,表明苜蓿丛枝病植原体为Candidatus Phytoplasma asteris成员之一,与植原体16SrI-B亚组成员关系密切。
• Select
  菜豆黄花叶病毒中国和叙利亚蚕豆分离物外壳蛋白的序列分析

  亓鹏, 王晓鸣, 何月秋

  植物病理学报. 2007, 37(4): 368-376.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  病毒病是影响云南省蚕豆生产的重要病害。对采集的蚕豆病毒病标样进行了组织印迹法检测,表明菜豆黄花叶病毒(BYMV)是最主要的病原。据此,以BYMV基因的保守序列设计了一对特异性引物,用BYMV的5个中国云南蚕豆分离物和1个叙利亚蚕豆分离物侵染的蚕豆叶片总RNA为模板,RT-PCR扩增获得了长度为907bp的目标片段。序列分析显示,此片段中包含822bp的外壳蛋白序列。6个分离物间的外壳蛋白核苷酸和推导编码蛋白质的氨基酸序列的同源性分别为86.4%~100.0%和96.7%~100.0%。与GenBank登录的34个具有完整外壳蛋白序列的BYMV分离物进行同源性和系统进化树分析的结果表明,6个分离物在核苷酸和氨基酸水平上与其它分离物的同源性分别为79.1%~97.9%和83.5%~98.5%,BYMV中国蚕豆分离物与日本蚕豆分离物同源性最高。外壳蛋白基因的序列特征揭示,在BYMV中的蚜传相关基序为NAG。
• Select
  引起番茄植株坏死病的病毒研究

  陈绍宁, 陈集双, 吴鹏, 杜志游, 朱为民

  植物病理学报. 2007, 37(4): 377-382.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  2004~2005年,在上海郊区夏番茄上连续发生严重的植株坏死病。表现为番茄植株矮化、顶端坏死、果实畸形和整株枯萎症状,并在叶柄和茎干上出现不规则坏死条斑,具有典型的病毒病特征。通过采集典型病叶、病果,进行病毒分离、dsRNA分析、寄主生物学研究、病毒纯化、病毒蛋白分析、组织病理学与形态学观察和ELISA检测,初步确定是由番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)侵染。经5次心叶烟单斑分离,获得N5分离物,对CP基因克隆测序的结果确定该分离物为ToMV。寄主反应测定显示,N5的寄主反应与常规ToMV株系存在明显区别,主要表现为常规番茄品种上出现严重坏死。进一步接种GCR品系番茄鉴定N5与ToMV-1株系相似。因此,作者认为,在上海地区番茄上流行并引起坏死病的主要病原可能是ToMV-1株系的1个变异株。
• Select
  芜菁花叶病毒欧亚分离物HC-Pro基因的克隆和序列分析

  施曼玲

  植物病理学报. 2007, 37(4): 383-389.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  16个芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)欧亚分离物分别来自奥地利、丹麦、德国、匈牙利、尼泊尔和英国6国。利用免疫捕获反转录PCR(Immunocapture RT-PCR,IC-RT-PCR)对16个分离物的HC-Pro(Helper component pro-teinase)基因进行PCR扩增,扩增产物克隆后进行序列测定,HC-Pro基因序列长度均为1374个核苷酸,编码458个氨基酸。16个分离物的HC-Pro基因核苷酸序列同源性为79.5%~99.8%,所编码的氨基酸同源性为94.1%~99.8%。对16个分离物及GenBank上已报道的其它14个TuMV的HC-Pro基因核苷酸的系统进化树分析表明:在16个TuMV欧亚分离物中,除了来自亚洲的分离物N23属Asian-BR组,其余15个来自欧洲的分离物都属于world-B组,其中分离物H1归属world-wide亚组,另外14个分离物则归属New World亚组。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• Select
  小麦蓝矮植原体寄主范围的鉴定及RFLP分析

  顾沛雯, 吴云锋, 安凤秋

  植物病理学报. 2007, 37(4): 390-397.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  小麦蓝矮是我国首次报道的小麦植原体病害。采用介体接种植物,症状观察和应用植原体16S rDNA基因通用引物对R16mF2/R16mR1进行PCR扩增,在接种小麦和传毒介体中均扩增出1.4kb的特异片段,鉴定出小麦蓝矮植原体新寄主7种。用巢式PCR方法对小麦蓝矮病田自然发病杂草进行分子检测,从表现症状的10种杂草中均扩增出1.2kb的特异片段。利用6种植原体特异性限制性内切酶对10种杂草的扩增片段进行RFLP(restriction fragment length polymor-phism)分析表明:扩增片段的RFLP图谱与目前已知的16Sr I组翠菊黄化植原体的RFLP图谱相近。鉴定出小麦蓝矮植原体田间自然新寄主10种。
• Select
  烟草感染PVY^N后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO关系研究

  吴元华, 钟丽娟, 赵秀香

  植物病理学报. 2007, 37(4): 398-402.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  本文采用常规摩擦接种和比色法研究了烟草感染PVY^N后叶脉坏死与总酚、类黄酮及PPO的关系。试验结果表明:感病品种K326接种PVY^N后总酚和类黄酮含量升高,且接种处理与未接种对照间总酚和类黄酮含量的差别随症状表现的加重有递增趋势;就部位而言,与根部及叶部相比,坏死严重的叶脉中总酚和类黄酮含量增加幅度最大,其含量分别增加了149.23%和152.97%;其PPO活性在接种PVY^N后3d时出现第一个高峰,比对照高213.61%,随后降至最低,但仍比对照高130.77%,在接种PVY^N后15d,坏死症状表现严重时,又迅速升高。抗病品种VAM接种PVY^N后无异常症状,其总酚和类黄酮含量也升高,但升高幅度不大,不同部位总酚及类黄酮含量增加的幅度也均小于25%,其PPO活性在接种PVY^N后稍有升高,但基本保持一个水平。
• Select
  枯萎菌拮抗芽孢杆菌BC98-I抗菌多肽的纯化

  高芬, 马利平, 乔雄梧, 郝变青

  植物病理学报. 2007, 37(4): 403-409.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  枯萎菌拮抗蜡状芽孢杆菌BC98-I分泌产生的抗真菌物质经粗提、Sephadex G100和DEAE52柱层析分离纯化后,得到了抗菌馏分P₁D₄。该馏分达到了电泳纯,SDS-PAGE电泳检测其分子量约为3.5kD,等电点为4.65。又经MALDI-TOF质谱检测,该馏分为精确分子量小于或等于1531.71D的多肽。氨基酸组成分析结果表明:馏分P₁D₄由Asp、Glu、Ser等12种氨基酸组成,富含酸性和极性氨基酸。结合以往研究结果,目标产物热稳定性好,对胰蛋白酶和蛋白酶K有良好耐受性,初步认为属低分子量的环状多肽。
• Select
  玉米大斑病菌黑色素的一些理化性质和光谱吸收特征

  曹志艳, 董金皋, 杨胜勇, 姚晓霞

  植物病理学报. 2007, 37(4): 410-417.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  黑色素是某些植物和动物真菌病害的致病相关因子,不同来源的黑色素其生物合成途径可能不同。对玉米大斑病菌细胞壁结合黑色素和从培养滤液中提取的黑色素进行理化性质、紫外吸收光谱和红外光谱扫描测定,并与标准品黑色素进行比较分析,明确了玉米大斑病菌黑色素具有与标准品黑色素相似的理化性质。DHN黑色素的特异性抑制剂——三环唑,对玉米大斑病菌0号和1号小种黑色素的产生均有抑制作用;以玉米大斑病菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增,得到了1,3,8-三羟基萘还原酶基因的同源片段,推测玉米大斑病菌黑色素合成于DHN途径。
致病性与抗病性遗传
• Select
  山东小麦纹枯病菌致病性与遗传分化关系的研究

  于金凤, 张天宇, 张修国

  植物病理学报. 2007, 37(4): 418-425.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  对山东麦区被鉴定为双核丝核菌的35个菌株进行致病性测定的基础上,选用15个随机引物对上述菌株进行了RAPD分析,共标记出171条DNA片段,其中多态性片段161个,多态率为94.15%。用UPGMA法构建系统树,以遗传距离0.33为阈值,被鉴定为AG-D融合群的33个菌株隶属于同一个RAPD组,而3个未定融合群菌株(WK-6、WK-37和WK-13)均为独立的RAPD组。以遗传距离0.25为阈值,将属于同一个融合群的33个AG-D群菌株划分为7个亚组,说明受试小麦纹枯病菌株间存在丰富的遗传多样性。综合分析受试菌株的致病力测定结果与RAPD分析发现,供试菌株的RAPD组与菌株致病力的强弱无明显的相关性,但少数菌株的致病力强弱与亚RAPD组有一定的相关性。
植物病害及其防治
• Select
  洋葱伯克霍尔德氏菌株Lyc2的鉴定及对棉苗的防病促生作用

  于晓庆, 郗丽君, 刘永光, 李光伟, 兰玉菲, 竺晓平, 李向东

  植物病理学报. 2007, 37(4): 426-432.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  从烟草根际土壤中分离到一株细菌菌株Lyc2,平皿对峙培养显示该菌可显著抑制多种植物病原真菌菌丝体的生长。温室盆栽试验表明,Lyc2对棉花苗期立枯病的防治效果达到48.8%;水培棉花苗试验表明,Lyc2能显著增加棉苗的鲜重和干重,但对株高的影响不显著。该菌经形态、生理生化试验测定及16S rDNA和ITS序列分析,初步确定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia);进一步通过种特异的recA基因序列分析,证明Lyc2菌株属于B. cepacia复合物中基因型IX,B.pyrrocinia。
研究简报
• Select
  黄瓜-酸黄瓜渐渗系霜霉病抗性及感病前后几种酶活性的变化

  曹清河, 陈劲枫, 李英, 刁卫平, 万红建

  植物病理学报. 2007, 37(4): 433-437.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Using resistant and susceptible cultivars as controls, the resistant evaluation to Pseudoperonospora cubensis was carried out in 12 introgression lines from wide cross between cucumber(Cucumis sativus L.) and sour cucumber(Cucumis hystrix Chakr.). Three enzyme activities including POD, SOD and PAL were analyzed before and 7 d after inoculation, and the POD isozyme was detected by polyacrylamide electrophoresis. The inoculation results showed that, of the 12 accessions, 3 were identified as high resistant, 5 were moderately resistant and 4 were moderately susceptible to downy mildew. The enzyme activities of POD, SOD and PAL were greatly increased in resistant accessions after inoculation. PAL enzyme activities showed close correlation with disease rating before or after inoculation, which implicated that PAL enzyme activity might be used to estimate the resistance to downy mildew. POD isozyme electrophoresis showed that the number and intensity for the bands of resistant lines were significantly increased more than those of susceptible lines after inoculation.
• Select
  黄瓜霜霉病菌保存方法

  张艳菊, 秦智伟, 周秀艳, 徐生军, 苏亚非, 蔡宁

  植物病理学报. 2007, 37(4): 438-441.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Pseudoperonospora cubensis(Berk. & M. A. Curtis) Rostovzev, the causal agent of cucumber downy mildew, is an obligate parasitic fungus. Up to now it can not be preserved on culture medium. In this study, the sporangia of P. cubensis were preserved in protective substances of 10% dimethyl sulfoxide plus 5% skim milk, 10% dimethyl sulfoxide plus 10% skim milk, sterilized water and leaves in vitro, and stored at -20℃, -70℃, and preliminary freezing at -20℃ for 24 h prior to -70℃ respectively. The results showed that the sporangia preserved in 10% dimethyl sulfoxide plus 5% skim milk, preliminary freezing at -20℃ for 24 h prior to -70℃ were still highly pathogenic after 12 months preservation. The percentage of germination of sporangia, incidence and disease index were 46%, 50.0% and 40.0 respectively 9 d after inoculation. This method solved the problem of P. cubensis preservation.
• Select
  马铃薯疮痂病菌致病相关基因的克隆及表达

  赵伟全, 刘大群, 杨文香, 张汀

  植物病理学报. 2007, 37(4): 442-445.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  A pathogenic-related gene nec1 was cloned in Streptomyces scabies CPS-1, potato scab strain. Analysis results showed that the length of open reading frame(ORF) for nec1 gene was 666 bp, and the GC content was 54.2%. Sequence alignment indicated that a 650 bp up-stream sequence shared 91% similarity with IS 256 family transposase nucleotide sequences by BLASTn searches against GenBank. The segments obtained by PCR amplification were digested by enzymes SphⅠand SacⅠ, and linked to the expression vector pIJ702. The recombinants were transformed into nonpathogenicity strain Streptomyces lividans 66 TK24. Bioas-say results suggested that the transformants possessed the same symptoms as pathogenic strain on potato tuber slices and radish seedlings, which implied that nec1 gene was associated with the pathogenicity of S. scabies CPS-1.
• Select
  小麦蓝矮病植原体转运蛋白secY基因片段序列分析

  张荣, 崔晓艳, 孙广宇, 康振生

  植物病理学报. 2007, 37(4): 446-448.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Wheat blue dwarf(WBD) is a disease caused by phytoplasma and only reported from China. A fragment about 1.3 kb in protein translocation gene, secY was amplified by PCR from the total DNA of di-seased wheat sample with primer pair secYF/secYR, which was designed based on secY gene sequence of known 16SrI group members. Nucleotide acid sequence analysis of amplified fragment indicated that the length was 1 240 bp. A phylogenetic tree based on secY gene sequences was constructed and showed that wheat blue dwarf phytoplasma was clustered into the Candidatus Phytoplasma asteris, subgroup 16SrI-C. Wheat blue dwarf phytoplasma showed high homology with clover phyllody phytoplasma strains based on sequence comparison and phylogenetic analysis.