2008年, 第38卷, 第2期　刊出日期：2008-04-10

  

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病原学
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  红掌胶胞炭疽菌的分子检测

  邢红梅, 丁平, 周晓云, 王克荣

  植物病理学报. 2008, 38(2): 113-119.

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  胶胞炭疽菌是引起红掌炭疽病的病原菌。根据GenBank中炭疽属不同种的ITS序列差异,设计了胶胞炭疽菌的特异性引物E1/E2,由此建立的PCR检测体系可以从38个胶胞炭疽菌菌株中扩增得到329 bp的特异性条带,而扩增其它近似或相关菌株时没有相应的特异性条带。该检测体系对胶胞炭疽菌基因组DNA的扩增灵敏度达到10 pg。将引物E1/E2与ITS区通用引物进行套式PCR扩增后,检测灵敏度至少提高10 000倍。当土中胶胞炭疽菌分生孢子达到200个/g土时可检测出。进一步利用此检测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测,均能快速稳定地检测出病原菌。
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  空心菜青枯病病原菌的鉴定

  何自福, 佘小漫, 虞皓, 罗方芳, 李华平

  植物病理学报. 2008, 38(2): 120-125.

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  空心菜青枯病是近年来在广东空心菜产区新发生的病害,病株率一般为5%~20%,严重达50%以上。症状初始表现为植株上部1~2片叶萎蔫、下垂,病叶失去光泽呈灰绿色;随着病情的发展,病叶不断增多,最终整株萎蔫,甚至倒伏。经细菌学鉴定、室内致病性测定、16S rDNA序列比较及系统进化分析,结果表明引起该病害的病原是茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum);致病性和碳水化合物利用试验结果表明,该病原菌属茄科雷尔氏菌1号生理小种,生化变种4。
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  水稻条纹病毒不同地区分离物的致病性研究

  程兆榜, 任春梅, 周益军, 范永坚, 谢联辉

  植物病理学报. 2008, 38(2): 126-131.

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  利用36个粳稻品种对来自江苏、云南、河北、山东等地的22个水稻条纹病毒(RSV)分离物进行致病性测定,根据各分离物在36个品种上的平均发病率,将参试分离物划分为HV、SH、MV、SL和LV 5个致病类型,致病力强弱为HV > SH > MV > SL > LV,其中MV和SL型占77%,表明RSV对粳稻的致病力中等偏弱。各致病型在地区间和年度间呈随机分布状态,暗示自然条件下特定地区的RSV为混合致病群。根据致病性测定结果同时将36个粳稻品种划分为免疫、抗、中抗、中感、感和高感6个抗感类型,其中中感和感病类型占70%,无高感和免疫类型,显示粳稻对RSV比较敏感但有一定程度的耐受性。根据试验结果筛选出11个具有鉴别能力的水稻品种,可对RSV分离物进行致病型鉴定。研究发现部分抗病品种对一些分离物表现为中抗~中感类型,接种量加大时可转为感病类型,由此提示各地在应用抗病品种防治水稻条纹叶枯病时应根据当地RSV致病型的差异,针对性地选用抗病品种,当灰飞虱超量发生时需及时做好治虫控病工作,并随时监测当地RSV致病型的变化,警惕品种抗性丧失。
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  甘薯茎线虫rDNA-ITS1区的PCR扩增与序列分析

  章淑玲, 张绍升

  植物病理学报. 2008, 38(2): 132-135.

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  利用PCR技术获得了甘薯茎线虫rDNA-ITS1区序列。序列分析表明,采自我国河北、山东、安徽的甘薯茎线虫16个地理种群的ITS1区序列分化为短型(S)和长型(L)2种基因型。山东费县芍药山乡4个地理种群为L型,ITS1区长度为466 bp;河北、安徽和山东费县新庄乡的12个地理种群为S型,ITS1区长度为288 bp。甘薯茎线虫与鳞球茎茎线虫(Ditylenchus dipsaci)的rDNA-ITS1序列同源性为52.0%~52.5%,与腐烂茎线虫(D.destructor)序列同源性为82.0%~85.4%;我国甘薯茎线虫不同地理种群间的序列同源性为96.6%~100.0%。
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  感染松材线虫病松树滑刃目线虫调查

  黄任娥, 叶建仁, 潘宏阳, 吴小芹, 谈家金

  植物病理学报. 2008, 38(2): 136-146.

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  本研究首次在全国范围内调查感染松材线虫病松树体内滑刃目线虫的种群组成,包括种类记述和数量组成分析。结果表明:在300份样品中共分离得到10种滑刃目线虫,隶属于3科、4属,其中有2个国内新记录种;它们是松材线虫、拟松材线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫、薄荷滑刃线虫、大核滑刃线虫、小麦长尾线虫(国内新记录种)、爱尔密那长尾线虫(国内新记录种)、李氏长尾线虫、吴氏长尾线虫和外滑刃科线虫一种;描述并且图示比较它们的形态特征。种群数量组成分析表明:松材线虫在感病松树体内占据绝对的优势,削弱了松树线虫群落组成的多样性,即线虫群落结构趋向单一化。研究还表明,利用长尾属线虫的捕食习性来控制中国松材线虫病的流行与危害值得进一步探索与研究。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  中国中部5省(市)草坪禾草立枯丝核菌的菌丝融合群研究

  石仁才, 商鸿生, 张敬泽

  植物病理学报. 2008, 38(2): 147-152.

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  2003~2005年,从我国冷季型草坪与暖季型草坪过渡地区的上海市、浙江省、山东省、河南省和陕西省草坪褐斑病的病株样本中,分离得到了43个立枯丝核菌分离物,其寄主包括多年生黑麦草(Lolium perenne)、高羊茅(Festuca arundina-cea)、草地早熟禾(Poa pratensis)、匍匐翦股颍(Agrostis palustris)、结缕草(Zoysia japonica)和狗牙根(Cynodon dactylon)。按照Parmeter等的方法对该过渡带的草坪禾草立枯丝核菌分离物进行了菌丝融合群的测定,结果表明,上述5省(市)草坪禾草立枯丝核菌的菌丝融合群包括AG1-1A、AG1-1B、AG2-1、AG2-2ⅢB、AG2-2Ⅳ、AG-4和AG-5。不同省份、不同寄主草坪禾草的菌丝融合群类型略有不同,主要融合群类型为AG-1和AG-2。AG1-1B和AG2-1是草坪上首次报道的立枯丝核菌融合(亚)群。
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  小麦新抗源一粒葡抗条锈病的组织学和超微结构研究

  张宏昌, 韩青梅, 王晨芳, 黄丽丽, 张庆勤, 康振生

  植物病理学报. 2008, 38(2): 153-164.

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  采用荧光显微镜、微分干涉显微镜和电子显微镜技术,系统研究了小麦新抗源一粒葡抗小麦条锈病的组织学和超微结构特征。结果表明:相对于感病品种铭贤169,一粒葡对条锈菌的侵染,在组织学和超微结构上均表现出明显的抗性特征。在组织学水平,表现为菌丝生长受抑,菌落发育延迟或败育,吸器母细胞和吸器数目明显减少;同时,侵染点的寄主细胞表现出不同程度的过敏性坏死症状。电镜观察发现,在一粒葡和感病品种中,条锈菌均可由芽管顶端直接进入或通过形成附着胞进入小麦气孔。其后,在一粒葡上,病菌胞间菌丝、吸器母细胞、吸器在细胞和亚细胞水平均发生了一系列异常变化,表现为原生质染色逐渐加深,液泡增多变大,逐渐消解原生质;胞间菌丝、吸器母细胞细胞壁不规则增厚;胞间菌丝线粒体肿胀,数目增多,逐渐解体;吸器母细胞细胞质逐渐空泡化后丧失其生理功能;吸器外质膜皱褶;吸器外间质加宽并有丝状或颗粒状物质形成,吸器体壁逐渐消解出现孔洞,吸器体最终畸形坏死。同时,寄主细胞产生一系列显著的结构防卫反应:形成胞壁沉积物、乳突、吸器鞘等结构,以及发生坏死,阻碍并抑制病菌的发育及扩展。
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  大豆根组织受尖孢镰刀菌侵染后基因表达反应的cDNA-AFLP分析

  刘喜梅, 许艳丽, 张韧, 吴茂森, 何晨阳

  植物病理学报. 2008, 38(2): 165-170.

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  为了阐明大豆受尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum,Fo)侵染后在基因转录水平上的感病反应,本研究用cDNA-AFLP方法,对Fo浸根接种后大豆根组织进行了基因转录谱的银染法检测分析。结果表明,在测定的大约1 000个大豆cDNA扩增片段(TDFs)中,16个是差异性表达的,其中9个受Fo诱导上调表达,7个被抑制下调表达。对这些差异性表达的TDFs进行克隆、测序及其同源性进行分析,发现其中6个具有已知或推断的生物学功能,包括钙调素结合蛋白(CaMBP)、BURP结构域蛋白和羟基多花碱-羟基烷宁转移酶等,其余10个功能未知。这些可能参与大豆感病性的差异性表达新基因片段的发现,为开展大豆感病性功能基因组学研究提供了材料。
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  一个小麦茉莉酮酸酯诱导蛋白基因的克隆和鉴定

  牛吉山, 常阳, 王保勤

  植物病理学报. 2008, 38(2): 171-177.

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  用基因芯片技术结合分池法(bulked segregating analysis,BSA)对参与小麦(Triticum aestivum L.)"兰考90(6)"抗白粉病反应或与抗病基因连锁的EST进行了分析。从"中国春"中克隆了一个与Ta-JA1高度相似的新的小麦茉莉酮酸酯诱导蛋白基因(GenBank登录号:EU035635),命名为Ta-JA2。Ta-JA2和Ta-JA1的cDNA序列有99%相同,编码304个氨基酸组成的多肽。Ta-JA2具有植物病原应答诱导蛋白-dirigent-类蛋白的典型保守功能域和jacalin-类植物血球凝集素的典型保守功能域。Ta-JA2主要在叶片和茎中表达,在根和幼穗中几乎不表达;在幼叶、壮叶和旗叶中的表达水平依次增强;在"中国春"和一个二粒小麦(Triticum dicoccoides)品系幼叶中的表达受白粉菌(Blumeria graminis f.sp.tritici)的诱导而增强;在"兰考90(6)21-12"叶片中的表达保持稳定而较高的水平。根据氨基酸序列的相似性建立了Ta-JA2类似蛋白的树形图,提供了植物中此类基因的进化信息。
致病性与抗病性遗传
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  大白菜抗芜菁花叶病毒的QTL分析

  张俊华, 屈淑平, 崔崇士

  植物病理学报. 2008, 38(2): 178-184.

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  以大白菜高抗TuMV-C₃株系的高代自交系A52-2和感病自交系GCⅣ杂交的F₂代255个单株作为构建遗传图谱的作图群体,通过EST-PCR-RFLP和AFLP分子标记的遗传分析,构建了包含12个连锁群,由124个遗传标记组成的大白菜分子遗传图谱。其中包括6个EST-PCR-RFLP多态性位点和118个AFLP多态性位点,该图谱覆盖长度为683.9 cM,平均图距5.52 cM。利用Windows QTL CartographerV 2.0软件和复合区间作图法进行分析,共检测到4个抗TuMV-C₃株系的QTLs位点。
植物病害及其防治
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  吖啶橙诱变提高枯草芽孢杆菌G3抗真菌活性

  顾真荣, 陈伟, 程洪斌, 马承铸, 龚新进, 沈丽娟

  植物病理学报. 2008, 38(2): 185-191.

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  枯草芽孢杆菌G3菌株正在登记为防治番茄叶霉病的生物杀菌剂。为改进该菌的抗真菌活性,用诱变剂吖啶橙诱变得到20个突变株,其中5个突变株Ga1、Ga8、Ga12、Ga1和Ga19在肉汤和PDA平板上形成粘液状菌落,完全不同于出发菌株。PDA平板抑菌圈试验,突变株对番茄叶霉菌和黄瓜灰霉菌产生比野生株G3更大的透明抑菌圈。其中Ga1菌株对番茄叶霉菌和黄瓜灰霉菌的抑菌带宽分别是G3的1.71和1.69倍。用番茄叶霉菌为指示菌的生物测定结果表明,突变株固体培养物或摇瓶培养物以最小抑菌浓度(M IC)和有效抑菌中浓度(EC₅₀)表示的抗真菌活性皆高于G3菌株。抗真菌活性以Ga1 > Ga8 > Ga19 > Ga12 > Ga13 > G3为序。参试菌株培养物的抗真菌活性与菌量(CFU)不相关,而与甲醇抽提代谢物的干重,尤其是伊枯草菌素A含量呈一定的正相关。突变株Ga1抗真菌活性最强,固体培养物或摇瓶培养物均是G3的3倍左右。摇瓶培养时,伊枯草菌素A动态分泌曲线表明,Ga1菌株产生比G3更多的伊枯草菌素A。Ga1菌株增强了合成伊枯草菌素A的能力。
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  生防菌Bs-916及高效突变菌株抗菌物质及其对水稻抗性诱导作用的研究

  李德全, 陈志谊, 聂亚锋

  植物病理学报. 2008, 38(2): 192-198.

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  枯草芽孢杆菌Bs-916是一种有效防治水稻病害的生防菌,为进一步提高其拮抗性能,获得更好的生防效果,运用离子注入(N+)的方法对Bs-916进行诱变,筛选到4株拮抗性能比出发菌Bs-916提高15%以上的菌株。TLC和HPLC定性、定量分析比较结果表明,Bs-916及其突变体分泌的脂肽类抗生素是表面活性素,突变菌株分泌的表面活性素比出发菌株有不同程度提高。室内抑菌结果表明,表面活性素能抑制纹枯病菌菌丝生长,引起原生质泄露。通过检测接种纹枯病菌、拮抗菌Bs-916及其突变菌株的水稻植株体内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性的变化,发现拮抗菌Bs-916及其突变菌株分泌活性物质对水稻具有诱导抗性作用;4个高效突变株比出发菌Bs-916对3种酶的活性影响加大;同时接种拮抗菌和纹枯病菌比单独接种拮抗菌、纹枯病菌对3种酶活性影响大。
研究简报
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  云南香石竹立枯病病原的鉴定及致病性研究

  李艳琼, 杨根华, 孔宝华, 陈海如, 杨泮川

  植物病理学报. 2008, 38(2): 199-202.

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  27 Rhizoctonia solani isolates from carnation with damping-off symptoms were identified as anastomosis group AG-4 based on cultural characteristics and anastomosis in Yunnan.Sequence analysis of 5.8S rDNA-ITS of yx and tx presented 99% sequence similarity with AG-4 HGⅠtester isolate.Pathogenicity tests showed that isolates of AG-4 HG Ⅰ were pathogenic to carnation.This is the first record of damping-off of carnation caused by AG-4 HG Ⅰ in China.
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  寄主诱导下的玉米弯孢叶斑病菌致病性分化相关蛋白的动态变化研究

  翟羽红, 陈捷, 刘力行, 黄秀丽, 程小舟, 朱恒, 陈云鹏, 徐书法

  植物病理学报. 2008, 38(2): 203-207.

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  Reinoculation and two-dimensional electrophoresis were performed to analyze the pathogenicity differentiation of Curvularia lunata.Resistant host inbred lines Shen135,Mo17,and 78599-1 were reinoculated(six generations) with low virulent isolate WS18.Results showed that the disease index had no significant change for the first 2 generations of inoculation.At the third generation,the incidence of disease was increased and the number of differential expressed proteins of mycelia were more than that in the first 2 generations.More than 100 differential expressed proteins were found in the mycelia of fifth generation when compared with the original one.In the experiment,10 differentially expressed proteins were identified by MALDI-TOF-MS analysis.Three proteins were related directly to the differentiation of virulence,2 were related to allergen,4 were related to the metabolism of carbon or signaling pathway and 1 was unkonwn to Curvularia lunata.
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  等离子体对小麦矮腥黑粉菌处理效果的扫描电镜观察

  孙振宇, 马占鸿, 王海光, 刘亮, 冯剑, 张贵新

  植物病理学报. 2008, 38(2): 208-210.

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  Plasma treatment is a new physical sterilization technology.In this study the teliospores of Tilletia controversa Kühn(TCK) were treated with plasma,and then observed by Scanning Electron Microscope(SEM).The results showed that the teliospores were broken into pieces.It set up some bases for research on plasma treatment of masses of wheat seeds containing teliospores of TCK.
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  基于小麦白粉病菌rDNA ITS序列的PCR分子检测

  曾晓葳, 骆勇, 周益林, 段霞瑜

  植物病理学报. 2008, 38(2): 211-214.

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  Wheat powdery mildew(Blumeria graminis f.sp.tritici) is the one of main wheat diseases in China.Based on the internal transcribed spacer(ITS) sequences of ribosome of B.graminis f.sp.tritici,three molecular primer pairs(F1/R,F2/R and F3/R) were designed to detect the fungal pathogen of wheat powdery mildew.The species specificity of these primers was confirmed.F1/R was demonstrated a higher sensitivity than the other two primer pairs,and could detect as low as 1 pg DNA of B.graminis f.sp.tritici.Furthermore,F1/R primer pair was used to detect the pathogen DNA extracted from wheat leaves showing chlorosis and typical symptoms of powdery mildew caused by artificial inoculation with B.graminis f.sp.tritici.The preliminary results demonstrated the usefulness of this primer pair and its potential applications in efficient detection of wheat powdery mildew pathogen from leaves with latent infections at early growth stages of wheat.
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  进境唐菖蒲种球南芥菜花叶病毒分子鉴定

  秦绍钊, 丁元明, 王云月, 寸东义, 刘忠善, 李春燕

  植物病理学报. 2008, 38(2): 215-218.

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  Arabis mosaic virus(ArMV) had been found in the Gladiolus hybridus imported from the Netherlands by DAS-ELISA.Two pairs of primers were designed according to the conserved region of the coat protein(CP) gene sequence of Arabis mosaic virus(ArMV),and two amplified bands with expected sizes of 750 bp and 250 bp were obtained by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR).The sensitivity of nested PCR was higher than that of single RT-PCR.Analysis of the partial sequenced CP gene showed that the isolate was closed to ArMV with similarity of 99.0%-100%.All the results demonstrated that the isolated virus was ArMV.
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  苏云金芽孢杆菌晶体蛋白对北方根结线虫生物测定方法的建立和杀虫效果评价

  余子全, 刘斌, 邹雪, 喻子牛, 孙明

  植物病理学报. 2008, 38(2): 219-224.

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  A bioassay procedure was developed to assess the toxicity of Bacillus thuringiensis crystal protein against Meloidogyne hapla,a root-knot nematode,under laboratory conditions.Reproducibility and precision of the bioassay results were optimal when forty 2nd stage juveniles were incubated in the dissolved crystal protein solution at 25℃,pH9.0 for 7 days.The juveniles were stained with 1% KMnO₄ for 2 hours or methylene blue solution for 1 hour to distinguish living and dead ones.By the bioassay procedure,the LC₅₀ value of strain YBT-1532 crystal protein against M.hapla was determined as 0.304±0.086 mg/mL(LC₅₀±1.96SE).Moreover,the strain YBT-1532 showed toxicity to Caenorhabditis elegans,a free-living nematode.All results indicated that YBT-1532 is a toxic strain to plant-parasitic nematode,and has the potential to control plant-parasitic nematode.