2008年, 第38卷, 第3期　刊出日期：2008-06-10

  

• 全选
  |

病原学
• Select
  大豆和大豆疫霉菌共培养体系的构建

  孙果忠, 朱振东, 武小菲, 崔友林, 王晓鸣

  植物病理学报. 2008, 38(3): 225-230.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  本研究旨在建立一个适于分析大豆遭受大豆疫霉菌侵染后基因表达研究的互作体系。在比较了15个携带不同抗病基因的大豆基因型的组织培养情况和7个大豆疫霉菌分离物及其游动孢子单孢系的毒力变化的基础上,构建了大豆悬浮细胞和大豆疫霉菌游动孢子的共培养体系,进而分析了共培养过程中大豆细胞的活力和防御基因表达情况。结果表明,不同亲和力菌株的游动孢子引起的大豆细胞活力变化十分相似;非亲和菌株的游动孢子可诱导寄主防御基因的表达发生变化。此系统为深入开展大豆抗性机制研究提供了良好的平台。
• Select
  冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)的快速分子检测

  张海峰, 任众, 刘翔, 张正光, 王源超, 吴新华, 郑小波

  植物病理学报. 2008, 38(3): 231-237.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  由冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)引起的疫病是一类植物检疫性病害。为建立该病原菌的快速检测技术,本文比较分析了冬生疫霉和其它疫霉的ITS序列,在此基础上设计了一对检测冬生疫霉的特异性引物751F/752R,该对引物从冬生疫霉中扩增得到一条616bp的条带,而其它19种疫霉和其它真菌菌株均无扩增条带,表明该对引物对冬生疫霉具有特异性。在25μL PCR反应体系中,引物751F/752R检测灵敏度为10龟基因组DNA;而以卵菌ITS区通用引物ITS1/ITS4和751F/752R进行套式PCR扩增,能够检测到10ag的基因组DNA,使检测灵敏度提高了1000倍。该检测体系对灭菌水中游动孢子的检测灵敏度可达0.5个游动孢子。结合快速碱裂解法提取发病组织的DNA,采用该PCR检测技术,在1个工作日内即可从人工接种发病的植物组织中特异性的检测到该病原菌。表明本研究建立的检测方法可用于冬生疫霉的快速分子检测。
• Select
  新疆棉花细菌性烂铃病病原菌鉴定

  刘雅琴, 任毓忠, 李国英, 丁胜利, 吉丽丽, 张恒

  植物病理学报. 2008, 38(3): 238-243.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  2006~2007年在棉花结铃盛期,从新疆奎屯和石河子等地的不同棉田中采集细菌性烂铃病样,分别从病部棉绒、种子和铃壳上分离纯化得到了20个细菌菌株;使用针刺法接种棉铃后,所有供试菌株均引起与田间自然发病相一致的症状;从中选取8个代表性菌株进行了形态特征、培养特性、生理生化反应的观察和测定,同时用细菌16S rDNA通用引物进行了PCR扩增和序列测定,登录GenBank比对后,将其鉴定为成团泛生菌(Pantoea agglomerans)。该病原菌在棉铃上的危害在国内尚属首次报道。
• Select
  黄瓜内生放线菌的分离、筛选及其活性菌株鉴定

  涂璇, 黄丽丽, 高小宁, 姚敏, 刘巍, 阿里马斯, 王美英, 康振生

  植物病理学报. 2008, 38(3): 244-251.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  从植物内生放线菌中筛选拮抗活性菌株和寻找新的农用活性代谢产物,可为植物病害防治提供新的资源。本研究结果发现黄瓜幼苗的根、茎、叶中均有内生放线菌的存在,根组织中的数量、种类明显多于叶片和茎,占总分离株的72.7%,以链霉菌的淡紫灰类群、灰褐类群为主。活性筛选试验结果表明,黄瓜内生放线菌中对12种靶标真菌和6种细菌具有拮抗作用的菌株分别占46.8%和39.0%,主要为分离自根组织的链霉菌淡紫灰类群。分离自黄瓜叶片的gCLA4菌株抑菌谱较广,其发酵滤液对供试12种靶标真菌均具有较好的抑菌效果,但对靶标细菌有选择性抑制作用。形态学、细胞化学和16S rDNA序列分析鉴定该菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendularectus)。
• Select
  不同来源的柑橘衰退病毒分离物基因组5'端A、F变异区序列克隆及分析

  丁芳, 洪霓, 钟云, 易干军, 王国平

  植物病理学报. 2008, 38(3): 252-257.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)组群自然条件下存在株系分化现象。本研究利用RT-PCR技术扩增、克隆了来自我国不同地区的21个柑橘衰退病毒分离物的5'端A、F变异区。通过分析发现,不同来源的各分离物在5'端A、F区存在较大的变异。21个分离物A区序列相似性最低为85.8%,最高可达99.8%,平均为95.9%;与GenBank中9个代表性株系的平均相似性为84.2%。F区序列相似性较A区高,为98.0%;相似性最低为94.3%,最高达99.1%。结果显示不同来源的CTV分离物5'端序列A、F区变异较大。
• Select
  从福建分离的广东赛葵曲叶病毒的分子特征

  Roy B. Mugiira, 吴剑丙, 吴祖建, 李桂新, 周雪平

  植物病理学报. 2008, 38(3): 258-262.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  从中国福建省表现曲叶和脉突症状的赛葵上分离到病毒分离物FJ1~FJ6。利用菜豆金色花叶病毒属病毒的特异性简并引物PA/PB,在所有6个分离物中都分离到了约500bp长度的病毒部分DNA片段。这些DNA片段与已报道的广东赛葵曲叶病毒(Malvastrum leaf curl Guangdong virus,MLCuGdV)的核苷酸序列同源性高达90%-93%。随机挑选FJ3分离物进行全基因组DNA的克隆测序。结果表明,FJ3 DNA全长2765个核苷酸,具有典型的双生病毒科病毒的基因组结构特征,与MLCuGdV的同源性为92.9%,表明FJ3是MLCuGdV的一个分离物。系统进化分析表明,除了MLCuGdV,FJ3与其它赛葵上分离到的双生病毒的亲缘关系都较远,而与分离自中国南方番木瓜上的双生病毒聚成簇,有较近的亲缘关系。进一步比较分析各蛋白编码的氨基酸序列发现,FJ3可能是一个种间重组分子,它可能是由中国番木瓜曲叶病毒或广东番木瓜曲叶病毒和另外的未知病毒重组产生的。
• Select
  马铃薯腐烂茎线虫特异性分子检测技术研究

  宛菲, 彭德良, 杨玉文, 何月秋

  植物病理学报. 2008, 38(3): 263-270.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  本研究利用通用引物(rDNA1/rDNA2)研究了21个国内甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)群体和1个韩国马铃薯茎线虫(D.destructor)群体的rDNA-ITS序列,从21个国内群体中扩增出2个大小不同的ITS片段,分别约为940bp和1100bp;经克隆、序列测定和分析比对发现其ITS区存在特异性差异,分别命名为A型和B型,其中18个群体DdTH、DdCL、DdJN、DdMY1、DdYX1、DdZZ、DdLN,DdDX1、DdFN,DdYX2、DDSX1、DdDX2、DdXY,DdLL、DdSX2、DdLY,DdMY2和DdPY的ITS扩增产物约为940bp,称之为A型马铃薯腐烂茎线虫(940bp),3个群体DdSH,DdTS,DdYS为B型马铃薯腐烂茎线虫(1100bp)。设计构建并筛选出A型和B型马铃薯腐烂茎线虫2对特异性引物DdS1/DdS2和DdL1/DdL2,分别扩增出A型马铃薯腐烂茎线虫、B型马铃薯腐烂茎线虫群体的特异片段252bp和485bp;引入D3A/D3B作为内标,设计出一步双重PCR检测技术;同时优化了检测体系和PCR反应程序。该技术具有较高的特异性和灵敏性,能快速、准确地检测出不同型的马铃薯腐烂茎线虫群体。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• Select
  GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达

  林董, 郑璐平, 谢荔岩, 吴祖建, 林奇英, 谢联辉

  植物病理学报. 2008, 38(3): 271-276.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融合基因(GFP-SP),并将其克隆至载体pMD18-T,得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-SP。酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生。将此质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP。以之转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,sf9)细胞,24~48h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的st9昆虫细胞形态有明显区别的变化。荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光,且大部分荧光集中在细胞质部分。这些结果表明,GFP-SP融合蛋白在st9昆虫细胞内成功表达。
• Select
  玉米大斑病菌CaM基因的克隆及三氟拉嗪的抑菌作用

  李志勇, 郝志敏, 司贺龙, 董金皋

  植物病理学报. 2008, 38(3): 277-282.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  以玉米大斑病菌为材料,根据同源序列法分别进行了3'端和5'端的RACE扩增,获得了玉米大斑病菌钙调素基因cDNA全长。利用genomic walking技术获得了CaM基因启动子序列,该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box、Spl、AP-2和TFⅡD)。Southem杂交结果表明,玉米大斑病菌CaM基因在基因组中以单拷贝形式存在。用CaM特异性抑制剂三氟拉嗪(trifluoperazine)处理玉米大斑病菌,发现其对孢子萌发和附着胞形成的抑制作用与浓度呈正相关,同一浓度下,抑制剂对附着胞形成的抑制作用大于对孢子萌发的抑制。推测CaM基因在玉米大斑病菌的致病过程中起着至关重要的作用。
• Select
  松材线虫体前端特异cDNA文库的构建及细胞壁松弛蛋白基因的克隆与初步分析

  林世锋, 郭立, 简恒, 张国珍

  植物病理学报. 2008, 38(3): 283-291.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  本研究将松材线虫切割为包括食道腺、分泌孔和头感器的体前端以及包括肠道的体后端,通过改进的固相杂交方法进行消减杂交,构建了松材线虫体前端的特异cDNA文库,利用该文库并结合RACE技术获得了松材线虫细胞壁松弛蛋白基因的全长cDNA。该基因编码149个氨基酸,经过比对发现其翻译产物与马铃薯金线虫EXPB1、EXPB2蛋白有46%和42%的相似性,与南方根结线虫的推定无毒基因蛋白(CAC27774.1)有39%的相似性,该基因产物可能在侵染过程中起着软化寄主细胞壁的作用,但具体功能有待进一步研究。
致病性与抗病性遗传
• Select
  小麦慢白粉品种的抗性组分研究

  马慧乾, 周益林, 段霞瑜

  植物病理学报. 2008, 38(3): 292-297.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  2003~2004年度和2004~2005年度在田间测定了16个小麦品种(系)对小麦白粉菌E20菌株的抗性组分,包括潜育期、侵染几率、产孢量、病斑扩展和传染期。结果表明,小麦慢白粉品种(系)与高感对照品种相比,表现为潜育期长、侵染几率低、产孢量低、病斑扩展慢的特点,且这4个抗性组分与对照的差异都达到了显著和极显著水平,但慢白粉品种的传染期变化无一定规律。参试慢白粉品种的抗性组分参数与病情曲线下面积(AUDPC)的相关分析表明,潜育期与AUDPC呈负相关,但相关性不显著;产孢量和病斑扩展与AUDPC呈正相关,两年数据相关性均达到显著水平;侵染几率与AUDPC呈正相关,但2003-2004年度相关性不显著,而2004~2005年度相关性显著;传染期与AUDPC相关关系不明显。由此可见,在慢白粉品种的病害流行中起主要作用的是产孢量、病斑扩展,而侵染几率、潜育期和传染期作用相对较小。
• Select
  抗白粉病小麦-中间偃麦草染色体小片段易位系的选育与鉴定

  石丁溧, 傅体华, 任正隆

  植物病理学报. 2008, 38(3): 298-303.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  对从普通小麦与中间偃麦草杂交后代中选育的一个抗白粉病新品系(AF-1)进行了形态学、细胞学和原位杂交(GISH)鉴定。结果表明:AF-1具有与小麦亲本相似的农艺性状,根尖细胞染色体数目为2n=42,花粉母细胞减数分裂中期(PMCMI)染色体构型为2n=21Ⅱ,且未见其他结构变异,细胞学上十分稳定。GISH结果表明,AF-1为中间偃麦草与普通小麦的一个小片段易位系,易位点位于一对染色体臂的中部偏着丝粒的位置。结合抗病调查结果,推断该片段上携带了一个来自偃麦草的抗白粉病基因。该片段可能是在杂种早期世代通过部分同源染色体配对或者单价染色体错分裂而形成的。
植物病害及其防治
• Select
  表达dsRNA的细菌提取液可抑制黄瓜花叶病毒对烟草的侵染

  张德咏, 朱春晖, 成飞雪, 何明远, 张战泓, 刘勇

  植物病理学报. 2008, 38(3): 304-311.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  利用RT-PCR分别克隆了CMV P3613株系的RNA2片段、MP(movement protein)基因片段及CMV AN株系的CP(coat protein)基因片段。以CP基因为中间间隔序列,分别构建了含有RNA2片段和MP基因反向重复片段的原核表达载体。体外转录试验表明:两个载体转录后都能形成预期大小的dsRNA。经过IPTG诱导,在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase和RNaseA消化处理,证实为dsRNA。将表达病毒基因dsRNA的细菌超声破碎后处理烟草,进行保护和治疗试验,结果表明:表达CMV MP基因和RNA2片段dsRNA的细菌破碎液能够诱导烟草对CMV产生抗性。接种病毒60d后,保护效果试验病株率分别为45%和60%,治疗效果试验病株率分别为75%和85%,而其他对照发病率均为100%。本研究结果证明了利用RNA沉默的原理,构建具有反向重复序列的原核表达载体,用细菌表达dsRNA的粗提取物可防治CMV对烟草的侵染。
• Select
  不同硅源制剂对小麦白粉病的作用效果及对白粉病菌孢子萌发的影响

  刘彩云, 周益林, 王荔军, 段霞瑜, 张福锁, 沈慧敏

  植物病理学报. 2008, 38(3): 312-316.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  研究了不同形态硅源制剂二氧化硅纳米粒子溶胶(60nm和100nm)、正硅酸乙酯、硅酸钠对小麦白粉病的作用效果以及对白粉病菌孢子萌发的影响。结果表明,在相同浓度下几种硅源制剂处理盆栽小麦幼苗对白粉病防效分别为48.78%、43.73%、40.31%和33.29%,室内处理小麦离体叶段对白粉病抑制率分别为59.67%、53.51%、51.10%和42.22%。离体叶段接种白粉菌后1.5~2h、6~7h取样,在相差显微镜下观察白粉菌孢子萌发过程,发现这几种硅制剂对白粉菌孢子初生芽管(PGT)的形成几乎没有影响,但对附着胞(AM)的形成有较大影响,其中以二氧化硅纳米粒子溶胶对AM的影响最大。
• Select
  甜瓜果实表面生防芽孢杆菌的类群与鉴别

  王奕文, 胡文兵, 许玲

  植物病理学报. 2008, 38(3): 317-324.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  从不同甜瓜果实表面可分离到在LB培养基上生长迅速、菌落形态呈明显差异的4类革兰氏染色阳性细菌。经过生理生化指标的鉴定、菌株间16S rDNA序列和部分特异性基因序列扩增以及种间遗传距离分析,将这4类芽孢杆菌分别鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的3个形态变种。这些芽孢杆菌经继代培养20代后,仍能保持稳定的菌落形态和对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑曲霉(Aspegillus niger)和粉红单端孢(Trichothecium roseum)等8种果蔬采后病原真菌显著且广谱的拮抗作用。结果表明,甜瓜果实表面广泛分布着具有拮抗性能的枯草芽孢杆菌和其近缘种解淀粉芽孢杆菌,可通过特定培养条件下(LB培养基上37℃培养48h)单菌落的生长速度和菌落外观形态特征快速分离并鉴别它们的类群,为开发甜瓜果实采后保鲜制剂提供理论依据。
研究简报
• Select
  上海地区草莓炭疽病病原鉴定

  任小杰, 梁艳, 陆金萍, 杨百荣, 徐敬友, 戴富明

  植物病理学报. 2008, 38(3): 325-328.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Seventeen isolates of strawberry anthracnose were obtained from Shanghai suburb. According to the temperature test for mycelial growth, these isolates were divided into two groups:one was strain CMf-04 with optimal temperature of 24℃, the other was including 16 strains with optimal temperature of 28℃, and most of which could produce sexual stage on PSA media, e.g. QPg-961. Conidia of CMf-04 were hyaline, unicellular, straight and fusiform, (12.1-16.4) μm×(3.6-5.4) μm. Conidia of QPg-961 were hyaline, unicellular and ovoid to oblong, (13.0-19.7)μm×(4.1-7.3) μm. On basis of morphologcal, biological characteristics and the sequences of ribosome rDNA ITS, isolate CMf-04 from the strawberry rotten fruits was identified as Colletotrichum acutatum; while all the other isolates from the diseased leaf stalks, runners and root crowns at strawberry plantlet propagation stage were belonged to Colletotrichum gloeosporioides. It proved that C. gloeosporioides was the main pathogen of the strawberry anthracnose in summer strawberry propagation fields in Shanghai and it is of significance for the breeding of resistant strawberry and its control.
• Select
  苹果黑星病菌遗传多样性的SSR分析

  胡小平, 董艳玲, 苟建军, 杨家荣

  植物病理学报. 2008, 38(3): 329-332.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Apple scab caused by Venturia inaequalis has a tendency to spread and threatens the development of apple production in recent years in China. The genetic diversity and population structure were investigated by using simple sequence repeat (SSR) markers. 51 strains were classified into 3 groups by UPGMA method as Xunyi, Xingping and U. K. population, each of them mainly including strains from its original place. A relatively high level of genetic diversity was revealed:H=0.425 3, I=0.675 8, PPL=66.67% (at species level); H=0.149 1, I=0.228 0, PPL=44.44% (at population level). A high level of genetic differentia-tion was detected among/within populations with Nei's Gst analysis and AMOVA. Molecular genetic variance within populations was greater than that among populations. Genetic variance among populations might result from barriers to gene flow (Nm=0.675 8). Genetic variance within populations might result from sexual propagation of V. inaequalis.
• Select
  新疆啤酒花潜隐病毒的检测及外壳蛋白基因的序列分析

  刘升学, 韩盛, 祝建波, 向本春, 曹连莆

  植物病理学报. 2008, 38(3): 333-336.

  摘要 ( ) PDF全文 ( )   可视化   收藏

  Hop samples from different region in Xinjiang were collected and detected by reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) in order to determine tile occurrence of HpLV. The RT-PCR products were 314 bp and 964 bp. Coat protein(CP) gene segments of isolates AW3 from Wensu, CH1 from Changji, K6 from Yanqi, SW8 from Shawan, TE2 from Emin, TY4 from Tacheng and YL4 from Yili were cloned. Nucleic acid sequence of the CP gene and deduced CP amino acid sequence alignments were compared with AB032469 registered in GenBank. The result showed that 8 HpLV isolates were divided into two groups. Among the isolates, AB032469, K6, AW3, CH1, TE2, TY4 and YL4 were classified as Group Ⅰ and SW8 was assigned to Group Ⅱ. Group I isolates fell into three small clusters. Nucleotide and deduced amino acid sequence comparisons within Group Ⅰisolates showed that the sequence homologies were 98.1%-99.9% and 99.0%-100%, respectively. Comparisons of nucleotide and deduced amino acid sequences between Group Ⅰ and Group Ⅱ showed that the sequence homologies were 95.8%-96.4% and 98.4%-99.0%, respectively. Amino acid identity was higher than nucleic acid identity among all isolates.