2010年, 第40卷, 第1期　刊出日期：2010-02-10

  

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病原学
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  小麦条锈菌水源11类群的RAPD分析及SCAR标记的建立

  郝保军, 王保通, 李强, 李高宝, 王芳, 张勃, 康振生

  植物病理学报. 2010, 40(1): 1-6.

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  鉴于水源11类群近年来一直处于优势地位,为简化其检测手段,本研究利用RAPD技术对该类群的8个主要致病类型进行了多态性分析,以寻找其中主要流行类型的特异性分子标记。结果如下:共筛选出10个碱基随机引物190条,其中94条可得到稳定清晰的扩增图谱,用该94条引物进行RAPD分析,发现各致病类型间遗传变异丰富;以引物S1410扩增得到了水源11-4的特异性DNA条带;以引物S1412和S1304扩增得到了水源11-14的特异性DNA条带;对引物S1304扩增得到的特异性DNA条带回收、克隆和测序,设计了1对19bp/18bp的引物,并成功地将其转化为对水源11-14特异的SCAR标记。以上结果表明,通过规模筛选来寻找小麦条锈菌生理小种的特异性DNA片段,并将其转化为稳定的SCAR标记,有可能建立起中国小麦条锈菌流行生理小种的快速分子鉴定体系。
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  壶瓶枣褐斑病病原菌的鉴定

  于占晶, 侯晓杰, 崔建州, 冉隆贤, 吕小红

  植物病理学报. 2010, 40(1): 7-13.

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  近几年来,山西红枣发生了1种严重的果实病害,症状表现为果顶或果肩部位形成红褐色的病斑。本研究以壶瓶枣为材料,对病菌进行分离。通过室内和田间致病性测定以及人工接种后再分离病菌,证明编号为CN535的真菌菌株为该病的致病菌。该病菌在PDA上7d菌落直径达69.2~73.5mm,基内菌丝和气生菌丝均发达,具明显的浅灰与墨绿色的同心轮纹;分生孢子单生或短链生,具纵横隔膜和短喙,大小为(22.5~40.0)μm×(8.0~13.5)μm,为典型的Alternaria属真菌特征。其rDNAITS序列分析结果表明该菌与A. alternata、A. tenuissima、A. longipes、A. mali和A. citri的同源性均为100%。用2对链格孢菌的专用引物AAF₂/AAR3和Aalt-F/Aalt-R分别扩增出相对应的341和450bp的片段。综合形态特征和分子分析结果,确定壶瓶枣褐斑病的病原菌为A. alternata (Fries) Keissler。
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  苹果树腐烂病室内快速评价方法的研究

  韦洁玲, 黄丽丽, 郜佐鹏, 柯希望, 康振生

  植物病理学报. 2010, 40(1): 14-20.

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  腐烂病是我国苹果树上一种严重的树干皮层腐烂病害,本研究拟探索快速、可靠、稳定及操作简便的病害室内评价方法。在"富士"苹果离体叶片、嫩梢、果实和枝条上造成不同伤口,强致病菌株03-8接种,25℃保湿培养后调查发现,不接菌对照有、无伤口均不发病;各种伤口接种病原菌均能发病,但伤口类型对病害影响很大。叶片正面较反面更有利于发病,叶片正面1针和10针的刺伤发病无明显差异;嫩梢叶痕接种较刺伤接种发病轻;果实表面针刺1针和10针及去除果皮造成伤口对发病影响大,差异显著;枝条烫伤接种后10d发病明显而其它材料在接种后1.5~2d即可发病。进一步用4个致病力不同的菌株验证评价方法的可靠性和稳定性,发现接种完全展开叶、嫩梢和枝条均可以充分显示不同菌株之间的致病力差异,但前两者重复性好、试验周期短、鉴定效率高,且操作简便、材料易得,因此建议用离体叶片或嫩梢作为材料,针刺1针接种,25℃保湿培养2d后调查,作为室内准确、快速评价苹果树腐烂病的方法,该方法可用于筛选抗病材料、评价分离株的致病性和药剂的防病效果等。
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  4种葡萄卷叶伴随病毒多重RT-PCR检测

  裴光前, 董雅凤, 张尊平, 范旭东, 李丽丽

  植物病理学报. 2010, 40(1): 21-26.

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  葡萄受卷叶伴随病毒侵染后,树势减弱,抗逆性变差,果穗着色不良,成熟期推迟,含糖量降低。目前已报道11种葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaV)。为提高检测效率,降低检测费用,本文在研究单个卷叶伴随病毒RT-PCR检测技术基础上,对4种葡萄卷叶伴随病毒的多重RT-PCR模板浓度、引物浓度和退火温度进行优化,建立了同时检测葡萄卷叶伴随病毒-1(GLRaV-1)、葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)、葡萄卷叶伴随病毒-4(GLRaV-4)和葡萄卷叶伴随病毒-5(GLRaV-5)的多重RT-PCR技术体系。模板浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、退火温度和循环次数对多重RT-PCR检测结果均有较大影响,而在一定范围内改变延伸时间和dNTP浓度对检测结果影响较小。对4种葡萄卷叶伴随病毒的PCR产物进行克隆和测序,扩增基因片段与GenBank中登录的基因序列同源性为95%~99%。所建立的多重RT-PCR技术检测田间样品效果良好。
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  侵染西瓜的5种病毒ZYMV、WMV、TMV、SqMV和CMV的多重RT-PCR检测体系的建立与检测应用

  王威麟, 张昊, 于祥泉, 吴云锋, 张文波, 张春平

  植物病理学报. 2010, 40(1): 27-32.

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  根据5种病毒小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的核苷酸保守区序列,设计特异性引物对,从影响多重RT-PCR (mRT-PCR)扩增的引物浓度、Mg²⁺浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行反应体系的优化,建立了一种能够同时检测ZYMV、WMV、TMV、SqMV和CMV的多重RT-PCR技术体系,并进行了实际应用。在一个体系中对上述5种病毒复合侵染的西瓜材料进行多重RT-PCR扩增,得到与试验设计相符的5条特异性条带,依次是542、485、410、354和293bp。该体系实现了对侵染西瓜的5种病毒的同时检测,极大地提高了检测效率,降低了检测成本,体现了多重RT-PCR的优越性。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  水稻白叶枯病菌鞭毛基体基因fliExoo缺失突变分析

  傅本重, 吴茂森, 陈华民, 何晨阳

  植物病理学报. 2010, 40(1): 33-39.

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  为了阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae,简称Xoo)鞭毛基体组分蛋白基因fliExoo的生物学功能,本研究用Gm^R抗性基因标记交换法成功构建了基因缺失突变体△fliExoo。与野生型菌株PXO99^A相比,△fliExoo鞭毛缺失,菌体易沉降,在0.3%半固体培养基上运动能力明显降低;尽管生长速率和胞外纤维素酶活性无明显变化,但胞外多糖产生和生物膜形成能力明显下降;对水稻品种日本晴的致病性和对非寄主烟草的致敏性反应明显减弱。基因互补可以使上述突变表型恢复。因此,鞭毛基因fliExoo突变不仅影响了细菌鞭毛依赖的运动性,而且对病原菌毒性相关的表型也产生了影响。
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  香蕉束顶病毒海口分离物基因组的克隆及序列分析

  冯团诚, 王健华, 刘志昕

  植物病理学报. 2010, 40(1): 40-50.

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  以海口香蕉束顶病株的幼嫩假茎和叶片总DNA为模板,通过反向PCR法克隆了香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)海口分离物(命名为BBTV-HaiKou)的6个DNA组分的全长序列。结果表明,DNA1~6序列全长分别为1106、1040、1058、1040、1013和1082nt。各组分非编码区各包含一个茎环共同区和一个主要共同区,同源性分别为91.55%和88.45%。各组分编码区均编码一个开放可读框(ORF),其中DNA1 ORF内部还有一个小的ORF。序列分析表明,BBTV-HaiKou分离物与其它分离物间的DNA1最为保守,DNA2变异最大。DNA1组分核苷酸序列与亚洲组、南太平洋组各分离物及ABTV (Abacá bunchy top virus)分离物同源性分别为93.1%~99.1%,89.6%~90.7%和76.2%~77.4%,相应的编码蛋白氨基酸序列同源性在BBTV和ABTV中分别为93.4%~100%和85.7%。根据Karan等的分类方法,确定BBTV-HaiKou分离物属于亚洲组成员。
致病性与抗病性遗传
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  欧洲小麦品种Mega抗条锈病基因的遗传分析及分子标记

  李洋, 袁喜丽, 姚强, 贺苗苗, 井金学

  植物病理学报. 2010, 40(1): 51-56.

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  本研究表明欧洲小麦品种Mega对我国小麦条锈病重要流行小种CYR30、CYR31、CYR32、Su-4和Su-14在苗期都具有良好的抗病性。采用小麦条锈菌小种CYR30对Mega与感病小麦品种铭贤169杂交的F₁、F₂和BC₁代及双亲进行苗期抗病性遗传分析,结果表明,Mega对CYR30的抗性由1对显性基因独立控制。采用SSR标记技术对其携带的抗性基因进行分子标记,在237对SSR引物中,发现位于5BL上的2个SSR引物位点Barc232、Wmc640在双亲和抗、感池间能扩增出稳定的特异性片段,与抗病基因连锁的遗传距离分别是3.7cM和8.6cM,暂命名为YrMe。本研究结果为科学利用Mega抗条锈基因培育抗病品种提供了依据。
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  马铃薯Y病毒HC-Pro、CI、NIb和CP基因介导的病毒抗性比较研究

  刘静, 陈雪梅, 宋云枝, 吴斌, 朱常香, 温孚江

  植物病理学报. 2010, 40(1): 57-65.

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  根据已克隆的马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N)的基因组序列设计引物,利用PCR扩增HC-Pro、CI、NIb和CP4个基因的3'端400bp cDNA区段,分别反向插入含有査尔酮合成酶基因(Chalcone synthase,CHS)内含子的双元载体pRCHS中,构建了含内含子的发夹结构RNA (intron splicing hpRNA,ihpRNA)表达载体pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。病毒抗性检测的结果显示:转pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP的烟草中,抗性植株的比例分别为55.34%、73.69%、61.54%和84.21%。大分子RNA和siRNA的Northern blot分析表明,目的片段转录产物的积累量与转基因植株的抗病性呈负相关,转基因植株中可检测到siRNA,说明所获得的抗病性是RNA沉默介导的。
植物病害及其防治
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  马铃薯环腐病生防菌株P1的鉴定、防病效果及促生作用研究

  王瑞霞, 贺运春, 赵廷昌, 田宏先, 李荫藩, 刘飞

  植物病理学报. 2010, 40(1): 66-73.

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  在马铃薯环腐病区采集健康的马铃薯Solanum tuberosum块茎,从中分离到1株对马铃薯环腐病菌Clavibacter michiganense subsp. sepedonicum具有强拮抗作用的内生细菌P1。经形态观察、生理生化鉴定,菌株P1归属为Bacillus sp.,进一步经16SrDNA序列对比分析,确定为巨大芽孢杆菌B. megatherium。经证明,P1菌株的培养液抗菌粗提物属于蛋白类,该抗菌蛋白对紫外光不敏感,pH为7.0时抑菌活性最强,温度高于80℃时抑菌活性明显下降。温室试验表明,P1菌株能显著提高马铃薯植株的株高、茎粗、产量及大薯率,其对马铃薯环腐病防效达53.4%。
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  红树内生细菌RS261防治辣椒疫病机理的初步研究

  柳凤, 欧雄常, 何红, 胡汉桥, 关秀琼

  植物病理学报. 2010, 40(1): 74-80.

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  本研究从菌株内生定殖、促生、抑制和诱导防御酶活性4方面探讨了红树内生细菌RS261菌株防治辣椒疫病的机理。结果表明,该菌株能进入辣椒等多种陆生植物体内定殖,在辣椒体内的定殖时间达26d以上,且对辣椒生长表现有明显的促进作用;抑制作用测定发现,RS261能够分泌产生抗菌物质抑制辣椒疫霉菌丝的生长和游动孢子囊的形成;辣椒体内丙二醛(MDA)含量及防御性酶活测定结果显示,经过RS261培养液处理后,辣椒苗体内丙二醛(MDA)含量和超氧化歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)以及过氧化氢酶(CAT)的活性等均较仅接种疫霉病菌的处理低,但可显著诱导辣椒体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。
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  连作年限对番茄根围土壤根结线虫二龄幼虫与自由生活线虫数量的影响

  时立波, 王振华, 吴海燕, 刘静

  植物病理学报. 2010, 40(1): 81-89.

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  保护地连作是根结线虫为害严重的主要原因,为评估连作年限对根结线虫数量及其与土壤线虫数量关系,选择典型的不同连作时间的保护地(种植番茄),研究番茄生长期间根围土壤不同土层的根结线虫二龄幼虫(second-stage juveniles,J2)与自由生活线虫数量的动态变化。结果表明:根结线虫J2数量随连作年限增加而增多,0和5-year土壤中根结线虫数量少,平均根结线虫数为1.1和2.1条/100g干土,8、10和12-year土壤中根结线虫数量平均值分别为154.9、68.3和861.8条/100g干土;在0~30cm土层,根结线虫J2数量随土层加深而增加,主要分布在20~30cm土层。土壤自由生活线虫数量随土层的增加而增多,连作对自由生活线虫数量无显著影响。0和5-year土壤中根结线虫群体占土壤线虫总数的比例小,属稀有类群,在土壤线虫中处于稳定的群落结构状态。连作8、10和12-year的土壤中根结线虫J2为优势类群,土壤中自由生活线虫数量与根结线虫数量呈现相反的趋势,根结线虫J2占土壤线虫总数的比例增加,自由生活线虫与根结线虫J2数量的比值显著降低(P<0.05)。
研究简报
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  蝴蝶兰软腐病中一种新致病菌的分离与鉴定

  褚晓玲, 杨波

  植物病理学报. 2010, 40(1): 90-94.

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  Soft rot disease often affects Phalaenopsis amabilis during the growing season. However, the pathogen of the disease is remaining poorly studied. In this study, bacterial strain R1 was isolated from soft rot tissues in Wuhan. The pathogenic, morphological, physiological, biochemical tests and 16S rDNA sequence analysis were carried out. The homology of 16S rDNA sequence between strain R1 and Pseudomonas grimontii was 99.72%, and its physiological and biochemical properties were also similar to those of Pseudomonas grimontiis. All these evidences indicated that strain R1 could be identified as a novel strain of Pseudomonas grimontii. The pathogenicity of the novel isolate was proved according to the Koch's postulates. This is the first report that Pseudomonas grimontii can cause soft rot disease of Phalaenopsis amabilis.
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  3种甘薯病毒多重RT-PCR检测方法的建立

  张业辉, 张振臣, 蒋士君, 秦艳红, 张德胜, 乔奇, 王永江

  植物病理学报. 2010, 40(1): 95-98.

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  A multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (multiplex RT-PCR) method was developed for the simultaneous detection and discrimination of three sweet potato potyviruses:Sweet potato feathery mottle virus (SPFMV), Sweet potato latent virus (SPLV) and Sweet potato virus G (SPVG). Three compatible sets of primers specific for each virus were designed in conserved regions of the coat protein (CP) gene for use in multiplex RT-PCR assay, and producing three distinct fragments 300, 420, and 600 bp, indicating the presence of SPFMV, SPLV and SPVG respectively. The individual RT-PCR assays and the multiplex assay were optimized for highest sensitivity and specificity. This study fulfilled the need for rapid and specific sweet potato potyvirus diagnostic tool and that also had the potential for investigating the epidemiology of sweet viral diseases.
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  壳寡糖诱导烟草防御酶系活性变化及PR-1a基因表达研究

  商文静, 吴云锋, 赵小明, 杜昱光, 商鸿生

  植物病理学报. 2010, 40(1): 99-102.

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  The activity change of defensive enzymes and PR-1a gene expression of tobacco (Nicotiana tabacum) seedling induced by chito-oligosaccharides were studied. The results showed that high level systemic acquired resistance (SAR) was expressed in tobacco plants treated with chito-oligosaccharides solution at the concentration of 50 μg/mL. PAL activity increased greatly with 2 peaks, the activity of SOD decreased initially followed by an increase with higher increment, and the activity of POD peaked early followed by a gentle fall in chito-oligosaccharide treated plants. The PR-1a gene was strongly expressed in tobacco due to systemic acquired resistance induced by chito-oligosaccharides. At 168 h after inoculation the expression quantity (co-pies/2 μL) of PR-1a gene was increased to 2 469.6 in treated tobacco leaf, reached 392.6% than that at 0 h after inoculation, it was increased 3.05 times of that in untreated control.
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  Clonostachys rosea 67-1液生孢子形成及其抗性研究

  张保元, 孙漫红, 张拥华, 谢响明, 李世东

  植物病理学报. 2010, 40(1): 103-105.

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  The growth and sporulation of Clonostachys rosea strain 67-1 in PD broth was observed and figured out. A large amount of submerged spores were obtained in shake flask with proprietary Czapek me-dium. Meanwhile, the colonies of strain 67-1were cultured in PDA plate and aerial spores were collected by elution. Resistances of submerged spores and aerial spores to high temperature, dry condition and UV treatment were determined. The results showed that the survival of the submerged spores kept in 60℃ for 30 min was 76.7%, while the aerial spores were hardly germinated in the same condition. After two weeks' drying treatment, the spore activities were 89.2% and 29.3%, respectively. Similarly, the activity of submerged spores was 72.6% and that of aerial spores was 19.7% when exposing to UV for 1 min. It is illuminated that deep submerged fermentation is more efficient than solid culture for strain 67-1 to produce chlamydospores, which act as main component in biopesticide mass production.
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  2008年我国部分麦区小麦白粉病菌群体对温度的敏感性

  宛琼, 丁克坚, 段霞瑜, 周益林

  植物病理学报. 2010, 40(1): 106-109.

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  The sensitivity of 113 isolates of wheat powdery mildew (Blumeria graminis f. sp. tritici) sampled from 6 provinces or cities in 2008 to temperature was tested by detached leaf segment method with setting up 5 different temperatures indoor. The results showed the mean ET₅₀ (which represents the temperature that is required to obtain 50% of the maximum effect) of all isolates tested was 23.02℃. ET₅₀ values of 17.70% isolates were more than 24℃. The highest and the lowest ET₅₀ of isolates were 25.22℃ and 19.42℃, respectively. There were a certain differences for isolates sensitivity to temperature among different provinces or cites. It was also found that when temperature increased during 22-26℃, the latent period of isolates prolonged, and the latent period of different isolates was different at the same temperature, too. These results will provide a reference for the oversummering division of wheat powdery mildew, as well as the effect of climate to the disease.