植物病理学报

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Chen J;Deng X;Civerolo E L;Lee R F;Jones J B;Zhou C;Hartung J S;Manjunath K L;B

植物病理学报. 2011, 41(2): 113-117.

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黄龙(梢)病被认为是世界柑橘生产上的毁灭性病害已超过一个世纪,但该病害的病原学至今还没有清晰地建立起来。根据16S rRNA基因序列分析,一组被称为"Candidatus Liberibacter species"的难培养细菌被认为与黄龙病相关。然而,要确定"Ca.Liberibacter spp."是黄龙病病原的柯赫氏定理并没有真正完成。令我们担忧的是,近年来有些文献频频指出"Ca.Liberibacter spp."是黄龙病的病原,其实该细菌与柑橘寄主的直接病理反应还没有完全确定。我们建议,在黄龙病病原学清楚之前,文献报道在这方面需要有准确的阐述。

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应用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术早期检测稻瘟病

李琼;孔宝华;范静华;蔡红;傅杨;陈海如;

植物病理学报. 2011, 41(2): 118-123.

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稻瘟病是一种严重危害水稻生产的真菌病害,早期监测和防治是关键。温室接种大田主栽品种合系39和感病水稻蒙古稻,定时观察发病症状。提取水稻病样总DNA,根据稻瘟菌28S rDNA基因序列,设计特异引物和TaqMan探针,进行荧光定量PCR检测。结果表明稻瘟菌在蒙古稻和大田主栽品种合系39上症状最初出现时间为接种后72 h,蒙古稻典型症状出现时间为接种后168 h,在合系39上出现典型症状的时间为接种后190 h以后。利用TaqMan探针荧光定量PCR技术,在接种12 h的蒙古稻和合系39上均能检测到稻瘟菌DNA,接种48 h,菌量拷贝数达到最高峰,接种72 h,菌量拷贝数开始下降。不同品种中病原菌拷贝数存在差别,在接种12 h的蒙古稻中稻瘟菌含量为7.2×103个拷贝数,在合系39中为4.9×103个拷贝数。本研究结果表明,应用实时荧光定量PCR技术可以在接种后12 h症状未显现之前检测到稻瘟菌,为稻瘟病流行监测和早期防治提供了科学依据。

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香蕉叶鞘腐败病病原鉴定

严玉宁;何红;叶艺俊;卢文标;文尚华;张秀清;

植物病理学报. 2011, 41(2): 124-130.

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香蕉叶鞘腐败病为近年来发生在广东、广西、海南等地蕉园的一种新病害。经病原菌分离及柯赫氏法则检测,证明引起该病的病原菌为一种细菌,根据致病性、寄主范围测定、菌体形态、培养特性、生理生化反应及16S rDNA序列分析将该病原细菌初步鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomerans)。成团泛菌危害香蕉,引起叶鞘腐败病在国内尚属首次报道。

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黄瓜细菌性角斑病免疫胶体金检测试纸条的研制

孙艳秋;赵奎华;曹远银;刘长远;梁春浩;

植物病理学报. 2011, 41(2): 131-138.

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应用免疫胶体金技术进行黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)的快速检测研究。为了研制黄瓜细菌性角斑病的免疫胶体金检测试纸条,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金,选择25 nm胶体金标记黄瓜细菌性角斑病菌多克隆抗体(CMb)。采用双抗夹心法,将CMb-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,将羊抗兔二抗和CMb包被在硝酸纤维素膜上,分别作为质控线(C)和检测线(T),组装成试纸条。该试纸条检测灵敏度为106 cfu/mL,与唐菖蒲疮痂病菌(Pseudomonas fluorescens biovarⅡ)等26个菌株无交叉反应,特异性强,检测时间为15 min。稳定性试验表明试纸条在37℃条件下放置15 d可保持检测结果的可靠性。用试纸条对田间采集的病叶进行检测,C线和T线清晰可见,缓冲液对照呈阴性反应。本试纸条可应用于生产上黄瓜细菌性角斑病早期快速检测,进而指导病害防治。

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黄瓜花叶病毒NASBA检测技术的建立

王小明;王健华;冯团诚;张雨良;吴育鹏;刘志昕;

植物病理学报. 2011, 41(2): 139-145.

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以香蕉花叶病病样为材料,初步建立了黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplifica-tion,NASBA)的检测技术。通过以香蕉叶片总RNA为模板,在黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)亚组ⅠRNA 2高保守区设计特异引物,进行NASBA反应,经5%琼脂糖凝胶电泳检测,阳性样品中出现了预期大小为310 bp的条带,而阴性和空白对照中均未出现。并对11份香蕉样品分别进行NASBA反应,并经过斑点杂交验证与RT-PCR检测比较,两者的检测结果一致,灵敏度相当,检出限量可达100 pg。

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五种烟草病毒TMV、CMV、TEV、PVY及TVBMV的多重RT-PCR同步检测

郑轩;成巨龙;赵震;李正男;王威麟;张昊;吴云锋;

植物病理学报. 2011, 41(2): 146-153.

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我国烟草病毒主要有烟草花叶病毒(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草蚀纹病毒(TEV)、马铃薯Y病毒(PVY)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV),通常发生复合侵染。本研究对我国5种烟草病毒的外壳蛋白基因部分序列设计引物,通过优化引物和模板浓度,摸索扩增参数,在一个体系中成功对5种病毒复合侵染的烟草材料进行多重RT-PCR扩增,得到237、273、347、456和547 bp共5条特异性条带,建立了能同时检测TMV、CMV、TEV、PVY和TVBMV的多重RT-PCR检测体系。对田间样品检测结果证明,多重RT-PCR体系能够同时检测5种病毒,并且灵敏度高。

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不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

吕典秋;刘尚武;邱彩玲;李勇;宿飞飞;王绍鹏;吕文河;

植物病理学报. 2011, 41(2): 154-160.

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灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。

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泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用

牟海青;周涛;赵文军;朱水芳;林彩丽;李怀方;范在丰;田国忠;

植物病理学报. 2011, 41(2): 161-170.

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根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches’-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane pro-tein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因。序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%。将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达。以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PaWB-AMPD抗血清。利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体。

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香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)特异性分子检测技术研究

王琼;耿丽凤;张东升;彭德良;

植物病理学报. 2011, 41(2): 171-177.

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香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)是一种国际公认的极具毁灭性的有害线虫,也是我国重要的进境检疫性有害生物。利用线虫通用引物对香蕉穿孔线虫7个不同群体的ITS进行PCR扩增、克隆及测序,获得ITS片段序列长度为706bp。经与国外香蕉穿孔线虫种群及近缘种的ITS序列进行比对及同源性分析,构建设计了1对香蕉穿孔线虫的特异性引物RsF1/RsR1,特异性扩增片段长度为271 bp;同时引入D2A/D3B作内标,研究出特异性检测香蕉穿孔线虫的一步双重PCR分子技术和方法,该项检测技术特异性好,耗时较短、操作简便、可靠。

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侵染美人蕉的CMV基因组全序列及其致病性分析

张立红;王海燕;杜志游;丁伟;毛倩卓;陈集双;

植物病理学报. 2011, 41(2): 178-187.

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对一株从美人蕉上分离到的CMV(Cah1-CMV)进行了全长克隆、全序列分析及寄主生物学研究。结果显示:其RNA1全长为3 356 nt,编码993个aa的1a蛋白;RNA2全长为3 045 nt,编码843 aa的2a蛋白和111 aa的2b蛋白;RNA3全长为2 220 nt,编码279 aa的3a蛋白和218 aa的CP蛋白。系统进化树分析显示:Cah1-CMV是CMV亚组IB株系。但是,该株系可以通过汁液摩擦接种侵染烟草(Nicotiana tabacum)、心叶烟(N.glutinosa)和番茄(Lycopersivon esculentum)鉴别寄主,可引起心叶烟顶端坏死,而在其他茄科寄主上均为典型花叶。将Cah1-CMV的2b替换到Fny-CMV中,产生FCah12b-CMV重组体,分析其在心叶烟上的致病性。结果显示:侵染早期,FCah12b-CMV引起心叶烟顶端叶黄褐坏死,与其母本病毒Cah1-CMV的症状相似,而非Fny-CMV症状;侵染后期,FCah12b-CMV并不引起植株系统性坏死。Northern blot-ting结果显示:Cah1-CMV、FCah12b-CMV和Fny-CMV在系统叶中的积累水平不存在明显差异。以上结果说明Cah1-CMV的2b基因在Cah1-CMV致病过程中具有重要功能,但并不是整株症状的决定因子;致病性差异与其基因组RNA在寄主体内的积累水平并不呈正相关性。

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AtEDR1介导拟南芥对稻瘟菌的抗性(英文)

郭传宇;郑银英;崔百明;

植物病理学报. 2011, 41(2): 188-195.

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稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)是一种半腐生病原菌,该病原菌可以侵染水稻,产生稻瘟病。对于水稻与稻瘟菌的互作机制,人们已经进行了大量的研究。然而,鉴于水稻基因组相对较大且稻瘟菌生理小种众多,致使研究进展缓慢。本研究通过将稻瘟菌生理小种Y34侵染拟南芥生态型Col-0,发现Y34可以感染Col-0,从而建立Y34-拟南芥互作模型,用以探究Y34与抗白粉突变体edr1的关系。结果显示,edr1比Col-0对于稻瘟菌更敏感。之前有研究表明,降低SA含量的突变体(pad4,sid2,nim1)均可抑制edr1相关表型。接种Y34于edr1与pad4、sid2、nim1形成的双基因突变体发现,所有双突变体的感病性比edr1单突均明显降低。推测EDR1可能在拟南芥抗稻瘟菌方面起一定正调控作用,且其作用依赖于SA途径的相关基因。

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枯草芽孢杆菌菌株BAB-1表面活性素的分离纯化及性质分析

钱常娣;李宝庆;郭庆港;鹿秀云;李社增;马平;

植物病理学报. 2011, 41(2): 196-202.

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枯草芽孢杆菌菌株BAB-1对番茄灰霉病菌有较强的抑制作用,为了明确其抑菌活性相关成分,通过盐酸沉淀、甲醇抽提法,从该菌株发酵上清液中分离得到了一种脂肽类化合物。经HPLC分析纯化后,发现其保留时间与表面活性素标准品基本一致。TLC层析结果表明该菌株能够产生与表面活性素标准品Rf值一致的成分。进一步通过电喷雾质谱分析,得到其[M+H]+值分别为m/z 1 009.3、1 023.4、1 037.4的成分,与已知的表面活性素3种同系物的[M+H]+值一致。最后采用PCR扩增特异性片段sfp的方法证实该菌株有产生表面活性素的同源基因。综合分析表明,枯草芽孢杆菌菌株BAB-1能够产生表面活性素,且提纯后的表面活性素具有明显的溶血和排油活性,并通过显微观察确定了其十字晶体状结构。

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生防细菌YC-10的杀线虫活性及其鉴定

成飞雪;张德咏;刘勇;王忠勇;程菊娥;何明远;肖启明;

植物病理学报. 2011, 41(2): 203-209.

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从烟草中分离出1株对根结线虫和胞囊线虫有较高生物活性的内生细菌菌株—YC-10。将该细菌发酵滤液原液及5、10、20和40倍稀释液处理南方根结线虫,96 h后线虫死亡率均达到100%,处理大豆胞囊线虫96 h,致死率大于90%,在植物线虫生物防治上显示出巨大的应用前景。通过形态特点、理化特征以及16SrDNA序列同源性分析将菌株YC-10鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。对发酵液活性成分理化性质研究表明,活性成分对热稳定,高温、蛋白酶K处理不影响其杀虫活性,而酸性条件下杀线虫活性比碱性中更强。为后续杀线虫活性成分的分离及杀线虫机理研究奠定基础。

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草石蚕块茎腐烂病病原菌鉴定(英文)

肖仲久;李红玫;蒋选利;

植物病理学报. 2011, 41(2): 210-214.

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亚麻品系9801-1抗白粉病基因的RAPD标记

杨学;关凤芝;李柱刚;赵云;王珣;路颖;宋洋;张利国;肖晖;陈浩;

植物病理学报. 2011, 41(2): 215-218.

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F2 populations were obtained from the cross between 9801-1 and DIANE.Bulked segregate and RAPD analyses were employed to identify molecules linked to the resistance to powdery mildew.OPP02 amplified about 792 bp polymorphic band in all individuals from 9801-1 and resistant bulk,but absent in all individuals from DIANE and susceptible bulk.By further analysis in F2 segregating population,the polymorphic band was found to be cosegregated with the resistant gene possibly.The fragment was sequenced,

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枯草芽孢杆菌SB1的抑菌活性及其对番茄青枯病的防治作用

连玲丽;谢荔岩;吴祖建;谢联辉;段永平;

植物病理学报. 2011, 41(2): 219-224.

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Bacillus subtilis strain SB1 isolated from tomato roots was evaluated for its ability to control tomato bacterial wilt under greenhouse conditions.Application of strain SB1 culture suspension suppressed tomato wilt disease both in sterilized and non-sterilized soil,providing 76.03% and 77.78% protection,respectively.Wilt symptom was significantly reduced when strain SB1 was applied before pathogen inoculation,while less suppression was conferred by strain SB1 application after pathogen inoculati...

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2011年, 第41卷, 第2期　刊出日期：2011-04-10

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