2012年, 第42卷, 第1期　刊出日期：2012-01-17

  

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病原学
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  红掌细菌性疫病病原菌的PCR特异性检测

  卢梦玲, 周晓云, 曾伟达, 陈一新, 刘琼光

  植物病理学报. 2012, 42(1): 1-9.

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  红掌细菌性疫病(Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae,简称Xad)是红掌等天南星科花卉毁灭性病害,该病通过带菌种苗调运不断在我国扩散蔓延,国内尚未有检测方法。通过筛选和重新设计引物,建立了Xad 的PCR 检测方法,结果表明,利用引物Xad-F / Xad-R 进行PCR,能扩增出检测Xad 的特异性DNA 片断,其灵敏度可达1 × 102 CFU / mL,DNA 的最低检出限为0. 44 ng / μL,可用于红掌苗的带菌检测和红掌细菌病害的鉴定。
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  中国甘薯病毒种类的血清学和分子检测

  乔奇,张振臣,张德胜,秦艳红,田雨婷,王永江

  植物病理学报. 2012, 42(1): 10-16.

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  2009～2010年，从我国18个省（市）采集了176份表现病毒病症状的甘薯样品。利用血清学、PCR和核苷酸序列测定的方法，对上述样品中的病毒种类进行了鉴定。血清学检测结果表明，供试样品中甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）的阳性率最高，达56.3%，其次为甘薯G病毒（SPVG）和甘薯类花椰菜花叶病毒(SPCaLV)，阳性率分别为34.1%和33.5%。PCR和核苷酸序列测定结果表明，我国甘薯上至少存在SPFMV、SPVG、甘薯潜隐病毒（SPLV）、甘薯褪绿斑病毒（SPCFV）、甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、甘薯脉花叶病毒（SPVMV）和甘薯卷叶病毒（SPLCV）8种病毒。此外，供试样品中没有检测出甘薯轻斑驳病毒（SPMMV），是否存在甘薯轻斑点病毒(SPMSV)、SPCaLV和C6病毒尚不能确定。
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  香石竹斑驳病毒( CarMV) 主要基因的分子变异分析

  佟爱仔, 孔宝华, 陈海如, 王连春, 胡中会, 李晓鹏, 蔡红

  植物病理学报. 2012, 42(1): 17-24.

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  香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus, CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一。本试验从12 个香石竹品种中获得CarMV 分离物,通过RT-PCR 扩增包含p7、p9、CP 3 个主要基因的片段,并对扩增产物进行克隆测序。通过序列比对发现CarMV 的p7、p9、CP 3 个基因有较高的稳定性,p7 基因核苷酸序列相似性为98. 10% ,氨基酸序列相似性为97. 81% ,其中氨基酸的第11 和14 位存在显著差异;p9 基因核苷酸序列的相似性为98. 80% ,氨基酸序列相似性为99. 13% ,氨基酸序列在第4 差异明显;CP 基因核酸序列相似性为97. 58% ,氨基酸的相似性为98. 43% ,氨基酸序列的第164 和331 位的变异存在相关性,整个CP 变异位点比较分散。证实p7 和p9 的变异位点主要集中在暴露与寄主互作相关的N 端,推测这是导致病毒变异,与寄主互作变异的重要位点。
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  脱氧雪腐镰刀菌烯醇( DON) 在小麦籽粒中的积累分析

  封薇,刘太国,张敏,陈万权

  植物病理学报. 2012, 42(1): 25-31.

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  镰刀菌产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)污染小麦后对人畜具有较大的毒害作用。为明确DON毒素在小麦籽粒中的积累数量及其与镰刀菌菌株、接菌数量、小麦品种和病害严重度的关系,试验采用单花滴注方法在5个抗病性不同的小麦品种上分别接种9 个禾谷镰刀菌菌株,每个菌株接种1 × 106 、1 × 105 和1 × 104 个/ mL 3 个分生孢子浓度,并利用ELISA 法测定收获麦粒中DON 毒素含量。结果表明,麦粒中DON 毒素含量差异主要是由于不同禾谷镰刀菌菌株产生毒素能力不同所致。接种菌株8003、4020 的所有麦粒中DON 毒素含量均显著高于相同条件下接种其他7 个菌株的小麦。当接种产毒素能力强的菌株时,小麦抗病品种表现出在一定程度上降低DON 毒素积累的能力。不同接菌浓度对小麦赤霉病的发病程度和麦粒中DON 毒素含量有显著影响,在相同条件下,接菌浓度越高,病害严重度越高,DON 毒素含量也越高;反之,接菌浓度越低,病害严重度越低,DON 毒素含量也越低。
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  白草花叶病毒承德玉米分离物3′-cDNA 片段序列分析

  崔小雯,高波, 许斐斐,李向东, 张春庆,苗洪芹

  植物病理学报. 2012, 42(1): 32-36.

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  采自河北承德11 个表现矮花叶症状的玉米样品,用甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV)和白草花叶病毒
  (Pennisetum mosaic virus, PenMV)简并引物扩增了基因组3′ 端约2. 1 kb 的片段并进行测序。Blast 结果表明其中8 个样
  品含有PenMV。扩增到的PenMV 序列均为2 135 nt,包括部分NIb 基因(985 nt)、完整的CP 基因(909 nt)和3′-UTR(241
  nt)。这8 个分离物CP 基因和3′-UTR 与GenBank 上其他PenMV 分离物相应序列的核苷酸一致率分别为89. 8% ~ 93． 4%
  和95. 9% ~ 97. 9% 。根据扩增的2 135 nt 序列和CP 基因序列构建系统发育树,8 个分离物与GenBank 上其他PenMV 分离
  物都分为2 个组:山西组和承德组。重组分析表明CD9 的CP 基因存在重组。
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  利用RNAi 介导的抗病性获得抗2 种花生病毒的转基因烟草

  晏立英, 许泽永, 廖伯寿

  植物病理学报. 2012, 42(1): 37-44.

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  分别以花生条纹病毒红安株系(PStV-Hongan)外壳蛋白基因(CP),花生矮化病毒轻型株系(PSV-Mi)和花生黄瓜花叶病毒(CMV-CA)复制酶基因2a为模板,通过PCR 方法分别得到PStV-CP 5′ 端,PSV-Mi 和CMV-CA 2a3′ 端150 bp 的片段,3 种片段混合物为模板经PCR 拼接得到450 bp 的片段,此拼接片段通过Gateway 系统重组至植物表达载体pK7GW1WG2,得到含反向重复拼接片段的植物表达载体pK450。冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101 后,叶盘法转化本生烟(Nicotiana benthamiana),经PCR 检测,获得转基因植株。对T1 代转基因植株分别人工接种3 种病毒,66. 7% 的植株表现对PStV 免疫,9% 的植株表现对CMV-CA 的恢复抗性,全部植株对PSV 感病。siRNA 的Northern blot 结果表明,所有转基因烟草植株都含有病毒特异siRNA,siRNA 含量随接种后时间延长而衰减。
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  安徽省辣椒疫霉交配型的分布及在无性后代的遗传

  戚仁德,汪涛,李萍,丁建成,高智谋

  植物病理学报. 2012, 42(1): 45-50.

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  测定了采自安徽省岳西、潜山、和县、合肥、寿县、淮南、阜南、亳州等不同地区的64 株辣椒疫霉菌株的交配型,并用10 μg / mL 的甲霜灵处理A1 交配型的菌株HN8 和A2 交配型的菌株HN3,分别获得抗性突变菌株HN8-Mrt和HN3-Mrt,进一步测定交配型在HN8、HN3 及其抗性突变株游动孢子后代中的遗传稳定性。结果发现,供试菌株中A2 交配型58 株(占90． 6% );A1 交配型6 株(占9. 4% ),未发现A0 、A1 A2 和A1 ,A2 交配型;A2 交配型全省各地均有分布,A1 交配型只出现在和县、淮南和阜南3 地;HN8-Mrt与HN8、HN3-Mrt与HN3 的交配型分别相同,各菌株单游动孢子后代的交配型均与其亲本分别相同。结果说明,辣椒疫霉交配型在安徽的分布呈不均等的态势,其中以A2 型占绝对优势;用甲霜灵处理不会诱导辣椒疫霉交配型的变异,交配型在辣椒疫霉的游动孢子后代中能稳定遗传。
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  啤酒花矮化类病毒及其突变体侵染性克隆的构建和生物学活性研究

  侯婉莹，姜冬梅，王红清，杨元爱，李世访

  植物病理学报. 2012, 42(1): 51-56.

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   啤酒花矮化类病毒重组突变体（HSVd D15）是世界上报道过的仅有的一个啤酒花矮化类病毒（HSVd）分子内重组突变体。为研究其生物学活性，本文分别构建了含有HSVd和HSVd D15 cDNA加倍串联序列的重组质粒，并对其在指示植株四叶黄瓜上的侵染活性进行了检测。结果表明：仅在接种含有HSVd cDNA多倍串联序列重组质粒的黄瓜上检测到HSVd的侵染，在同样条件下接种了含有HSVd D15 cDNA两倍串联序列重组质粒的黄瓜上未检测到子代类病毒。HSVd D15的生物学活性还需通过改进接种方法或将其接种无毒的自然寄主李树苗木来进一步研究。
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  小麦抗白粉病基因Pm21 的抑制基因

  任天恒,陈放, 张怀琼,晏本菊,任正隆

  植物病理学报. 2012, 42(1): 57-64.

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  小麦-簇毛麦6VS. 6AL 易位染色体含有抗白粉病基因Pm21,在我国的小麦育种中被广泛应用。近年来,一些含有Pm21 基因的小麦品种(系)开始感染白粉病。为探索含Pm21 的品种(系)感染白粉病的原因,本研究在6VS. 6AL 易位系与小麦品系(种)R14 和川农12 的杂交后代中利用分子标记CINAU17-1086 和CINAU18-723 辅助选择的遗传背景相对简单的F7 和F8 近等基因系为材料,研究了小麦抗白粉病基因Pm21 的抗病性表达。结果发现,在3 个含有6VS. 6AL 易位染色体的感病F6 植株繁殖的F7 近等基因系中发生了白粉病抗性的分离,分离比率符合13 感病︰ 3 抗病的理论值。在随机选取的F7 感病小麦单株所繁殖的F8 近等基因系中,有7 / 13 的株系一致地重感白粉病,有6 / 13 的株系发生了抗白粉病的分离,其中2 / 13 的株系分离比符合3 感病︰ 1 抗病、4 / 13 的株系分离比符合13 感病︰ 3 抗病的分离模式。这一结果指出,小麦株系中的抗白粉病基因Pm21 的抗性表达受小麦基因组中的一对显性抑制基因所控制,该基因来源于小麦品种(系)川农12或R14,建议命名为SuPm21。本研究指出,在把外源基因引入小麦的研究中,有利的外源基因与不含抑制基因的受体遗传资源同等重要。
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  拟南芥BOI 基因在抗氧化胁迫和细胞死亡中的功能分析

  罗红丽, 宋凤鸣,Tesfaye Mengiste

  植物病理学报. 2012, 42(1): 65-72.

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  本文利用BOI(Botrytis Susceptible 1 Interactor)基因敲减(knock-down) 株系、过量表达株系以及烟草瞬时表达系统,研究了BOI 基因在细胞程序化死亡(PCD)中的作用以及BOI 蛋白中RING 和WRD 结构域的功能。结果表明,BOI 基因的表达下调导致抗氧化胁迫能力下降,弱化了对活性氧介导的PCD 抑制作用;BOI 过量表达或瞬间表达可以增强对活性氧介导和α-吡啶甲酸诱导的PCD 的抑制作用。进一步研究发现,BOI 蛋白中的RING 结构域是BOI 抑制PCD 所必需的,WRD 结构域与BOI 对PCD 的抑制作用关系不大。
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  棉花黄萎病原真菌菌体对链霉菌4 种胞外水解酶活性的影响

  薛磊, 薛泉宏, 卢建军, 申光辉,赵娟

  植物病理学报. 2012, 42(1): 73-83.

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  以大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb. )菌体为唯一碳源,采用液体培养法测定供试病原菌菌体对4 株拮抗链霉菌胞壁水解酶合成的诱导作用;采用平皿气生菌丝水解和显微观察法验证4 株拮抗链霉菌对大丽轮枝菌菌丝的溶解作用。结果表明:①大丽轮枝菌菌体可以诱导供试链霉菌合成几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶及滤纸纤维素酶;当菌体添加量为10 g·L - 1 ,28℃ 培养7 d 时,上述4 种诱导酶活性可达峰值,其值分别为70. 13 - 129. 05、31. 04 - 37. 34、6. 24 -8． 75 及1. 84 - 3. 35 U。②链霉菌粗酶液对大丽轮枝菌菌丝有溶解作用。③4 株链霉菌菌丝均可缠绕在大丽轮枝菌菌丝上,并在缠绕处使病原菌菌丝溶解。
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  南方水稻黑条矮缩病毒一步双重RT-PCR 检测技术及其应用

  王强, 周国辉, 张曙光

  植物病理学报. 2012, 42(1): 84-87.

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  An one-step dual RT-PCR method was developed for Southern rice black-streaked dwarf virus (SRBSDV) detection from host plants and insect vector white-backed planthopper (Sogatella furcifera Horvath,Hemiptera: Delphacidae), from which two cDNA fragments of the viral genome S5 and S10 were amplified
  simultaneously. Two primer pairs, S5-F1 / S5-R2 (5′-ttacaactggagaagcattaacacg-3′ / 5′-atgaggtattgcgtaactgagcc -3′) and S10-oF / S10-oR(5cgcgtcatctcaaactacag -3′ / 5′-tttgtcagcatctaaagcgc -3′), were selectedfrom 40 primer pairs based on SRBSDV genome sequences, and amplified viral S5 ORF1 fragment (819 bp) and cp gene fragment ( 682 bp), respectively. Using total RNA extracts from infected plant leaf tissue or individual planthopper adult as templates, one step RT-PCR reaction in the conditions of annealing temperature of 53℃ with the final concentrations of 240 nmol / L S5-F1 / S5-R2 and 120 nmol / L S10-oF / S10-oR generated a similar yield of two amplicons in argrose electrophoresis analysis. Sequence analysis confirmed the correct
  result of the amplification. Additionally, several commercal RNA extraction kits was proven to be fit for the template preparation, and the protocol for total RNA extraction from plant leaf tissue and individual planthopper was simplified by sample grinding direct in eppendorf tube. This method can be used for SRBSDV detection of dried or 70% alcochol soaked planthopper samples stored over one month in room temprature. Key words: Southern rice black-streaked dwarf virus; Sogatella furcifera Horvath
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  马铃薯Y 病毒贵州黔西烟草分离物P1 基因序列分析

  张俊祺,代昌明,杨军, 宋纪真,罗朝鹏,王燃,林福呈

  植物病理学报. 2012, 42(1): 88-92.

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  Potato virus Y (PVY) is the type member of the genus Potyvirus and infects several important solanaceous crops, including tobacco. PVY is one of the most widespread and economically destructive viruses.The P1 region of PVY had been used to determine the diversity, evolution and the homology based on the
  geographic location of the virus. The P1 region of PVY tobacco isolate from Qianxi in Guizhou Province was cloned and sequenced. Database searches and multiple sequence alignment showed subtle variation within the same strain, while apparent variation between O strain and the other three strains, N, NTN and N∶O. Moreover, variation in P1 region of Qianxi isolate derived from the gene mutation rather than the recombination among genomes. Phylogenic analysis revealed that the clustering only discriminated O strain from others. Consequently, sequence analysis in P1 region is unable to afford strain determination.
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  玉米弯孢叶斑病菌酵母双杂交cDNA 文库的构建及评价

  荆晶,刘铜,陈捷

  植物病理学报. 2012, 42(1): 93-96.

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  BD SMART technique and LD-PCR were applied to synthesize double strand cDNA(ds cDNA).The ds cDNA and pGADT7-Rec were transfered into competent yeast cell to construct yeast two-hybrid cDNA library of Curvularia lunata by homologous recombination method. The results showed that library capacitance was 2. 46 × 105 and transformation rate was 2. 13 × 105 / μg pGADT7-Rec. The plaque titer of the library was 2. 5 × 108 pfu / mL and the recombination frequency was 88. 24% . The length of inserted cDNA fragment was ranged from 0. 4 kb to 3 kb in average. This is the first time to use BD SMART technique to construct yeast two-hybrid cDNA library of C. lunata by homologous recombination.
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  陕西省小麦赤霉病菌对多菌灵敏感性研究

  白耀博, 刘恒, 李强, 王芳, 王保通

  植物病理学报. 2012, 42(1): 97-100.

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  The mycelium growth rate method was used to test the sensitivity to carbendazim (MBC) at distinctive concentrations in 136 isolates of Fusarium graminearum from 19 counties of 6 districts in Shaanxi Province in 2008. The distinctive MBC concentration was 4 mg / L for testing of resistance and sensitivity. The results showed that average 50% effective concentration (EC50 ) of 136 tested sensitive isolates were (0. 908 6 ± 0. 062 3) mg / L. All the isolates were sensitive to MBC. The fungicide of MBC could be continually applied wheat production in Shaanxi.
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  玉米大斑病菌人工接种方法研究

  刘烨珏，张敏，伍智华，李静英

  植物病理学报. 2012, 42(1): 101-104.

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  The efficient and accurate method of inoculating Exserohilum turcicum on maize is most important for studying the corn leaf blight. In this study, four approaches including spore suspension spraying, inoculation with grinding infected maize leaves, inoculation liquid inoculum into the leaf whorl and inoculation with inoculated sorghum seeds were compared with natural induction in fields during different growth stages of maize in the greenhouse and field. The results showed that disease incidence of all varieties tested were up to 100% by inoculating with inoculated sorghum seeds during the booting stage (11 to 12 leaf stages). This method will not only guarantee the enough pathogen inocula but also be easy to use, and could be an effective way for disease resistance identification in field and greenhouse. 
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  拮抗链霉菌B28 的分类鉴定及其生防作用研究

  申屠旭萍,于冰,边亚琳,胡靓, 马正,童朝明,俞晓平

  植物病理学报. 2012, 42(1): 105-109.

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  An antagonistic Streptomyces strain B28, isolated from the soil collected in Tianmu mountain of Zhejiang Province, was identified as Streptomyces diastatochromogenes by morphological , physiological & biochemical characteristics and 16S rDNA sequence alignment. Antagonistic study indicated that its secondary metabolite toyocamycin had an antifungal activity on the mycelial growth of seven species of plant pathogenic fungi. The results showed that toyocamycin possessed marked inhibitory activity against Rhizoctonia solani and the EC50 value was 0. 58 μg / mL. The effective of toyocamycin against Botrytis cinerea and Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum was much higher than that against Colletotrichum gloeosporioides, the EC50 value of
  toyocamycin in inhibiting B. cinerea, F. oxysporum and C. gloeosporioides were 13. 65 μg / mL, 12. 33 μg / mL, and 30. 15 μg / mL respectively.