2016年, 第46卷, 第3期　刊出日期：2016-06-10

  

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病原学
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  草莓丝核菌根腐病的病原菌鉴定

  钟 珊,张 涛,杨 俊,孙 海,张国珍

  植物病理学报. 2016, 46(3): 289-293. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.001

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  由丝核菌引起的根腐病是草莓生产上的重要病害之一。本研究基于形态学、菌丝细胞核荧光染色、菌丝融合群测定、rDNA-ITS序列分析和柯赫氏法则验证,对北京地区引起草莓根腐病的丝核菌进行了鉴定。2014年从北京市昌平区温室草莓根腐病病样中分离纯化获得的3个代表菌株,经形态学和细胞核荧光染色,确定均为双核丝核菌(binucleate Rhizoctonia, BNR),且与双核丝核菌AG-A融合群菌株发生菌丝融合,菌株CP-Z的rDNA-ITS序列与GenBank中丝核菌属的有性型角担菌属(Ceratobasidium)AG-A融合群 4个菌株的相似性达100%。菌株CP-Z接种草莓根部,引起根系变黑、腐烂,植株死亡,从接种发病的根部可重新分离到双核丝核菌。双核丝核菌AG-A融合群引起草莓根腐病为国内首次报道。该病原菌菌丝生长适温为25℃~28℃。
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  河南省小麦赤霉病菌种群组成及致病力分化

  徐 飞,杨共强,王俊美,宋玉立,刘露露,张姣姣

  植物病理学报. 2016, 46(3): 294-303. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.002

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  为明确河南省小麦赤霉病种群组成和致病力分化情况,2007—2014年对河南省15个市84个田块的327个小麦赤霉病菌进行种群鉴定、毒素化学型分析和致病力分化研究,结果表明:Fusarium graminearum s. str.和F. asiaticum是河南省小麦赤霉病的优势种群(97%),F. pseudograminearum(2.1%)、F. culmorum(0.3%)、F. equiseti(0.3%)、F. verticillioids(0.3%)为次要种群;对于禾谷镰刀菌复合群来说,豫北地区分布只有F. graminearum s. str.,豫中地区F. graminearum s. str.和F. asiaticum都存在,以F. graminearum s. str.为主,豫南地区F. graminearum s. str.和F. asiaticum都存在,以F. asiaticum为主;291个F. graminearum s. str.都为15ADON类型,26个F. asiaticum菌株中22个为3ADON,1个为15ADON,3个为NIV类型;F. graminearum s. str.(15ADON)也存在致病力分化,强、中、弱致病力的菌株在河南省的比例约为2:2:1。
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  芹菜细菌性软腐病病原的分离与鉴定

  晋知文, 宋加伟, 谢学文, 柴阿丽, 石延霞,李宝聚

  植物病理学报. 2016, 46(3): 304-312. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.003

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  由植物病原细菌引起的芹菜软腐病在北京地区普遍发生,其中以顺义及通州区县较为严重。自发病芹菜茎段中分离细菌,通过接种芹菜进行致病性测定,确定了54个致病菌株。虽然菌株间致病力有一定的差异,但大多数菌株对芹菜致病力强。通过培养性状和菌体形态观察、生理生化反应和Biolog测定,结合胡萝卜软腐果胶杆菌Pectobacterium carotovorum 6个管家基因(pgi、rpoS、mdh、proA、mtlD、icdA)的基因扩增、序列测定和多基因联合系统发育分析,将病原菌鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌P. carotovorum的3个亚种。其中45个菌株为P. carotovorum subsp. odoriferum,频数为83.33%;6个菌株为P. carotovorum subsp. carotovorum,频数为11.11%;3个菌株为P. carotovorum subsp. brasiliensis,频数为5.56%。上述结果显示,北京地区芹菜细菌性软腐病的病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌P. carotovorum的3个亚种,其中以P. carotovorum subsp. odoriferum为优势种。
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  LNA探针实时荧光定量PCR检测
  小麦矮缩病毒体系的建立

  王 亮,刘 艳,王锡锋

  植物病理学报. 2016, 46(3): 313-319. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.004

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  本研究通过对多个小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus, WDV)小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N 端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时荧光定量PCR检测方法,确定最优反应条件下的引物和探针终浓度分别为0.5 μmol/L和0.3 μmol/L。该方法建立的标准曲线斜率及相关系数分别为-3.424 3和0.997 3,扩增效率为96.0%,重复性试验组内变异系数为0.11%~1.34%,组间变异系数为0.44%~1.21%,最低检测限为55 copies/μL,其灵敏度是普通PCR的100倍以上。与普通TaqMan探针荧光定量PCR相比,该方法所用探针长度大大缩短,减少了探针间形成二级结构的机会,探针设计更加简单、方便。该方法适用于田间样品的早期监测,为病害流行调查提供了高效快捷的技术支撑。
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  基于全基因组序列的
  黄瓜绿斑驳花叶病毒重组和系统发育分析

  许 帅,刘 群,耿 超,王 莹,田延平,贾 曦,李向东

  植物病理学报. 2016, 46(3): 320-327. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.005

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  通过RT-PCR扩增了黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)济南分离物(CGMMV-JN)的基因组片段。序列测定结果表明CGMMV-JN基因组全长6 424核苷酸(nt),5′-和3′-UTR分别为60和176 nt,含有4个ORF,分别编码129 kDa和186 kDa复制酶相关蛋白、29 kDa移动蛋白及17.4 kDa外壳蛋白。CGMMV-JN与另外29个CGMMV分离物全基因组核苷酸序列一致率为90.0%~99.7%。重组分析发现韩国KOM(AF417243)、以色列EC(KF155231)、印度(DQ767631)和我国河北的CHB(KJ658958)4个分离物在RdRp编码区存在重组。系统发育分析结果表明,这些分离物可分成3个组。选择压力分析结果表明cp基因处于正选择,其它基因处于负选择。本文研究的结果为黄瓜绿斑驳花叶病毒的监测及防控提供了理论依据。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  LuxR家族调控因子 LuxR-2460 对西瓜嗜酸菌致病力及生物膜形成的调控

  王铁霖, 杨玉文, 赵廷昌

  植物病理学报. 2016, 46(3): 328-337. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.006

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  LuxR家族的调控因子在革兰氏阴性细菌中起重要作用。对西瓜嗜酸菌一个LuxR家族的调控因子 LuxR-2460的调控作用进行研究。生物信息学分析表明该调控因子有2个保守结构域:N-末端为REC 结构域,C-末端为HTH 结构域。通过同源重组双交换的方法,构建了luxR-2460全基因缺失的突变株,该基因缺失突变株能够引起菌株致病力、运动能力及蹭行运动能力的下降及生物膜形成能力的增强。qRT-PCR 检测结果表明,该基因缺失导致鞭毛基因fliR在突变株中的表达量下调,影响病菌鞭毛的形成。说明luxR-2460基因对西瓜嗜酸菌的致病能力及相关因子具有重要调控作用,可以作为该病害防控的潜在靶标。
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  大豆疫霉MAPK基因的鉴定与转录分析

  叶文武, 李爱宁, 王晓莉, 王源超

  植物病理学报. 2016, 46(3): 338-346. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.007

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  疫霉菌包括大豆疫霉等重要植物病原物,属于茸鞭生物界卵菌门,在进化上与真菌相差甚远;由于分离培养与遗传转化等相对困难,目前对其生长发育和致病机理的研究相对滞后。本研究综合运用基因组学和转录组学方法,首先对植物病原卵菌与真菌的蛋白激酶特别是MAPK进行了鉴定和比较,然后对大豆疫霉MAPK的基因结构、蛋白功能域以及转录模式等进行深入分析。结果表明,植物病原卵菌比真菌含有更多的蛋白激酶(包括MAPK),且卵菌及其近缘物种硅藻的MAPK与真菌在进化上相对独立;大豆疫霉的14个MAPK中,4个具有非典型的磷酸化唇序列,7个含有PH、C2、WW、PAS等与细胞信号转导相关的其它功能域;转录分析表明,大部分MAPK可能在大豆疫霉生长发育与致病的整个过程或特定过程中发挥重要作用。本文通过对蛋白激酶特别是MAPK的分析揭示了植物病原卵菌(与真菌相比)在细胞信号转导网络与机制上的独特性与复杂性,可为进一步研究疫霉菌MAPK的生物学功能及其信号调控机制提供参考。
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  RxLR效应因子Avr3a、Avr4和IPI-O
  在中国致病疫霉菌株中的组成

  韩 淼, 汪晓雯, 朱小琼, 国立耘

  植物病理学报. 2016, 46(3): 347-356. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.008

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  由致病疫霉(Phytophthora infestans)引起的马铃薯和番茄的晚疫病是一种世界范围内的重要病害。在致病疫霉与寄主的互作过程中,效应因子对于病原物能否成功入侵与定殖起到了关键作用。本研究检测了来自中国马铃薯主产区的37株致病疫霉菌中编码Avr3a, Avr4和IPI-O三种效应因子的基因组成,研究发现来自国内的所有供试菌株中只有1株分离自马铃薯的和2株分离自番茄的致病疫霉含有无毒基因Avr3a(编码Avr3a^KI),其余菌株均含有avr3a(编码Avr3a^EM);所有菌株中都仅含有编码截断蛋白的avr4;从37株国内菌株中共检测到了25种ipiO变异型,其中20种为新变异型,聚类分析的结果表明这些变异型仍属于已报道的三类ipiO,而且大部分ipiO变异型为无毒型,可以被抗性基因Rpi-blb1识别。该研究结果表明avr3a和avr4普遍存在于中国致病疫霉菌株中,推测大部分菌株可以克服R3a和R4抗性基因;而ipiO的无毒变异型仍然普遍存在于国内致病疫霉群体中,可以被马铃薯含有的抗性基因Rpi-blb1识别。
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  青枯雷尔氏菌胞外蛋白指纹多态性分析

  郑雪芳, 刘 波, 朱育菁, 代升飞

  植物病理学报. 2016, 46(3): 357-366. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.009

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  采用SDS-PAGE技术对70株不同来源及致病力青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）进行胞外蛋白指纹多态性分析，研究结果表明，供试青枯雷尔氏菌菌株呈现丰富的胞外蛋白指纹多态性，多态性比率为100%。不同来源青枯雷尔氏菌分泌的胞外蛋白不同，EZ-Tn5TM插入诱变菌株电泳出20条不同大小蛋白条带，分子量集中在20~97 kD ，且菌株间蛋白条带相似或完全相同；60Co辐射诱变菌株共电泳出16条不同大小的蛋白条带，多数蛋白分子量44.3 kD；野生型菌株电泳的蛋白条带最多，共获得26条不同大小的蛋白条带。进一步对37株不同致病力的野生型菌株进行胞外蛋白含量测定，结果表明，不同致病力菌株胞外蛋白含量差异大，强致病力菌株分泌的胞外蛋白含量较高，为1.026～5.963μg/mL，无致病力菌株胞外蛋白含量较低，为0.083～0.761 μg/mL。
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  柑橘黄龙病症状与“Candidatus Liberibacter asiaticus”
  PCR检测结果的相关性分析

  许美容, 陈燕玲, 邓晓玲

  植物病理学报. 2016, 46(3): 367-373. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.010

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  柑橘黄龙病症状较为复杂,且因寄主品种、生长期、病程等因素而异。利用PCR检测其病原菌“Candidatus Liberibac-ter spp.”是目前柑橘黄龙病诊断的可靠方法之一。分析柑橘黄龙病症状与PCR检测结果的相关性有助于提高黄龙病的田间诊断准确率。本研究结果表明,与PCR检测相比,根据症状诊断柑橘黄龙病具有较高的假阳性率(8.20%)和假阴性率(50%);通过分析1 839个样品的症状与病原PCR检测结果发现,表现为斑驳型黄化、均匀黄化和“绿岛”这3种叶部症状以及“红鼻子果”和畸形果这2种果实症状的PCR病原检出率高;具有斑驳和黄化、黄化和“绿岛”、“绿岛”和花叶等复合症状样品的PCR检测“Ca. L. asiaticus”的阳性率最高;直径小于1 cm的幼果中的“Ca. L. asiaticus”检测稳定性低。这些结果为更准确地通过症状诊断柑橘黄龙病提供了科学依据。
致病性与抗病性遗传
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  2002—2014年陕西省小麦条锈菌生理小种
  变化动态和小麦品种(系)的抗病性

  李 强, 李高宝, 岳维云, 杜久元, 杨立军,
  康振生, 井金学, 王保通

  植物病理学报. 2016, 46(3): 374-384. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.011

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  为明确陕西省小麦条锈菌的群体结构、变异动态和新育成小麦品种(系)的抗病性,为病害流行预测、防治以及抗病育种提供依据,本研究于2002—2014年从陕西省8个市(区)的28个县(区)和毗邻的甘肃省、四川省和湖北省部分地区共采集鉴定小麦条锈菌标样2 779份,监测到条锈菌生理小种和致病类型45个,其中,CYR33和CYR32为目前陕西省小麦条锈菌主要流行小种,新致病类型G22-9和G22-14虽然目前出现频率不高,但对贵农系列、92R系列以及Moro均有毒性,且出现频率呈上升趋势。目前小麦条锈菌群体中Hybrid46致病类群和水源11致病类群占绝对优势,这与我国小麦品种抗病基因单一化有较大关系,应加强开发和利用新的、多元化的抗源材料。对2 952份陕西省新育成小麦品种(系)抗病性测试结果表明,其整体抗性水平呈上升趋势。综合条锈菌生理小种监测和抗病性分析结果,目前小麦抗条锈病育种应以抗CYR33和CYR32为主,同时注意对G22-9和G22-14的抗病性研究。
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  小麦种质 Edinburgh-b 白粉菌
  侵染下的基因表达谱分析

  董 娜, 张军刚, 胡铁柱, 陈向东, 张亚娟, 茹振钢

  植物病理学报. 2016, 46(3): 384-393. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.012

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  Edinburgh-b是从英国爱丁堡引进的小麦抗白粉病新种质，为了深入了解该种质的抗白粉病分子机制，本研究采用Agilent公司的4 SymboltB@ 44 k小麦表达谱芯片，以Edinburgh-b接种白粉菌0 h为对照，分析其在白粉菌胁迫下的基因表达谱。结果表明，在43 603个探针中筛选出差异表达探针5 835个，其中上调表达2 801个，下调表达3 034个。差异表达基因主要包括与代谢相关的酶类、转录因子、病程相关蛋白、防卫反应基因和信号传导因子等。Pathway分析显示苯丙烷类生物合成、水杨酸信号通路、茉莉酸生物合成、活性氧代谢等被激活，乙烯生物合成和生长素信号通路被抑制，推测水杨酸和茉莉酸信号通路共同参与了Edinburgh-b对白粉菌的防御反应。选取上调和下调表达共17个基因进行实时定量RT-PCR验证，表明基因芯片数据具有良好的重复性。
流行学与生态学
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  2013年我国部分麦区小麦白粉菌群体
  对温度敏感性及其与毒性的关系

  韩龙萍，范洁茹，周益林，邹亚飞，段霞瑜, 李宁静，朱映峰

  植物病理学报. 2016, 46(3): 394-400. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.013

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  研究小麦白粉病菌群体对温度的敏感性及其与毒性的关系，可为气候变化背景下小麦白粉病的长期发生趋势预测和防治提供依据。本研究对2013年采自云南、四川、河南、北京和陕西五省（市）的小麦白粉菌标样进行分离纯化，获得90个单孢子堆分离物，采用小麦离体叶段法进行温度敏感性测定，并利用32个已知抗病基因品种（系）进行毒性测定，且对两者之间的相关性进行分析。结果表明，供试菌株ET50分布于19.78℃~25.15℃，平均ET50为23.22℃，其中73.34%的供试菌株ET50值介于22℃到24℃之间，小于22℃的菌株占10%，大于24℃的菌株占16.67%。利用Popgen1.32软件对5个省（市）小麦白粉病菌群体的毒性进行多样性分析，结果表明五省市小麦白粉菌群体毒性水平上的多样性指数 H 值为0.237 0，其中四川群体毒性多样性水平最高，Nei’s基因多样性指数 H 值为0.221 2，河南群体最低， H 值为0.197 5。小麦白粉菌群体对温度敏感性与毒性多样性相关性分析结果表明，ET50与毒性多样性（ H 和 I 值）间存在显著的负相关。
植物病害及其防治
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  番茄灰霉病菌胁迫下壮观链霉菌SC11
  对寄主的促生作用及防病机理

  连清贵,甘 良,马 青,蓝星杰,张 菁,宗兆锋,王 阳

  植物病理学报. 2016, 46(3): 401-408. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.014

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  放线菌SC11是一株从土壤中分离的具有广谱抑菌活性的壮观链霉菌。平板对峙试验表明SC11能显著抑制离体灰葡萄孢的生长;盆栽试验表明,SC11对番茄灰霉病的防病效果达到65.3%,高于对照药剂腐霉利(55.8%);对番茄植株内防御酶活性、丙二醛(MDA)和脯氨酸含量的测定表明,SC11处理可诱导植株叶片组织防御酶活性、脯氨酸含量等升高,而MDA含量降低;SC11还能明显促进番茄幼苗的生长,株高、茎粗、叶绿素含量,和对照相比均达显著水平。上述结果表明,壮观链霉菌SC11能有效防治番茄灰霉病,诱导植株防御酶活性的提高,促进番茄幼苗生长。
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  烟草青枯病拮抗菌株X-60的分离鉴定
  及其表型组学分析

  汪汉成,王茂胜,黄艳飞,王 进,商胜华,张长青

  植物病理学报. 2016, 46(3): 409-419. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.015

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  为了探寻烟草青枯病的生防菌剂,本研究以烟草青枯病菌为指示菌,从烟草根围土壤中分离获得拮抗细菌X-60,其抑菌圈大小约为37 mm。经形态观察、Biolog鉴定及16S rDNA序列分析,该细菌为解淀粉芽孢杆菌。抗菌谱测定表明,它对烟草灰霉病菌、烟草炭疽病菌、烟草黑胫病菌和烟草赤星病菌均具有较强的拮抗作用,菌丝生长抑制率分别为51.28%、58.97%、60.53%和72.78%。温室盆栽试验表明,X-60菌液灌根对烟草青枯病发生具有良好的预防作用。表型芯片研究结果表明,解淀粉芽孢杆菌能代谢41%的碳源、77%的氮源、86%的磷源、69%的硫源,具有91种生物合成途径;72种碳源、45种氨基酸类氮源和190余种肽类氮源均能显著促进该菌的生长;其高效代谢的磷源有二硫代磷酸盐和半胱胺S-磷酸盐,高效代谢的硫源有硫代硫酸盐、S-甲基-L-半胱氨酸和硫辛酰胺。研究结果为解淀粉芽孢杆菌X-60生防菌剂的开发及将其应用于烟草青枯病的生物防治提供了理论基础。
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  苹果壳色单隔孢溃疡病菌在原木上的
  侵染及热处理技术研究

  杨翠云 , 张露茜, 叶 军, 戚龙君, 杨 轶, 张 颖

  植物病理学报. 2016, 46(3): 420-424. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.016

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  本研究从欧洲进境水曲柳原木上分离获得了检疫性病原真菌苹果壳色单隔孢溃疡病菌(Botryosphaeria stevensii Shoemaker),分别测定了烘箱热处理和炭化烘房热处理对该病菌存活的影响。结果发现苹果壳色单隔孢溃疡病菌可以侵染至原木的木质部组织,原木中心处理温度达到60℃并持续6 h可杀灭原木中携带的病菌。研究结果对进境原木携带苹果壳色单隔孢溃疡病菌及其它重要病菌的检疫处理有较好的参考价值。
研究简报
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  侵染甜椒的番茄黄化曲叶病毒的
  分子鉴定和全序列分析

  杜开通,王少杰,雍容婧,左琳彧,邓丛良,范在丰,周 涛,周 琦

  植物病理学报. 2016, 46(3): 425-428. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.017

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  西科麦2028抗条锈病的遗传特点

  李邦发

  植物病理学报. 2016, 46(3): 429-432. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.03.018

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