2016年, 第46卷, 第6期　刊出日期：2016-12-10

  

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病原学
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  环介导等温扩增技术检测大丽轮枝菌

  田擎，张海峰，曾丹丹，姚艳，任林荣，王源超，郑小波

  植物病理学报. 2016, 46(6): 721-729. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.001

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  本研究基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，通过比对分析大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)与其相近种不同靶标序列间的差异，选取Gpd(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因作为靶标基因，设计并筛选了四条特异性强、灵敏度高的LAMP引物和两条环引物，建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的大丽轮枝菌的检测方法，并进行了特异性、灵敏度实验及田间发病组织的检测。该方法在62 ℃等温条件下进行核酸扩增反应70 min，扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)，反应后根据染料颜色变化判定扩增结果。特异性试验中，仅含有大丽轮枝菌菌株DNA的反应管扩增后呈天蓝色的阳性反应，而其他供试菌株均呈紫色的阴性反应。该方法的最低检测限为100 pg·μL^-1，在土壤中检测的灵敏度为10个孢子/0.25g土壤。该技术能够检测出棉花发病组织中的目标菌，对采自江苏和山东的24份疑似病害样本进行检测，11份为阳性。该方法的建立为大丽轮枝菌的检测及其所致病害的诊断提供了新的技术。
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  丁香疫霉病菌PCR和实时荧光PCR检测

  刘劼，焦彬彬，宋绍祎，于翠，印丽萍，易建平

  植物病理学报. 2016, 46(6): 730-738. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.002

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  为了快速、准确地检测丁香疫霉病菌 (Phytophthora syringae， PSY)，根据GeneBank中PSY的ITS序列设计特异引物Psy1/Psy2和探针P-Psy，建立了常规PCR和实时荧光PCR检测方法。利用引物Psy1/Psy2扩增供试的26株PSY能得到585 bp的预期目标条带，但扩增其它61个非PSY供试菌株不能得到预期产物，检测灵敏度为12 pg菌丝DNA;探针P-Psy对供试26株PSY表现为阳性扩增，而对其它菌株和空白对照均表现为阴性扩增，检测灵敏度可达120 fg菌丝DNA，比常规PCR高100倍;引物Psy1/Psy2和探针P-Psy对5 g土壤中PSY卵孢子的检测灵敏度分别为20 000个和200个。样品检测试验表明两种PCR方法可用于口岸植物检疫中快速、准确和特异地检测丁香疫霉病菌。
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  新疆加工番茄马铃薯Y病毒株系鉴定

  梁学超，路遥，刘丽娜，郑银英，向本春

  植物病理学报. 2016, 46(6): 739-747. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.003

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  马铃薯Y病毒 (Potato virus Y，PVY) 是世界范围内对茄科属植物造成影响的重要病毒，为了解PVY对新疆加工番茄的危害，本文采集205份加工番茄样品进行血清学检测，结果PVY^O、PVY^O\N\C、PVY^N检出率分别为20%、18.05%和0％，且PVY不同株系总检出率达24.9%。根据血清学检测结果，在苋色藜 (Chenopodium amaranticolor) 上进行单斑分离获得2个PVY分离物S1-10、S2-12，其基因组序列分析结果显示，S1-10分离物是PVY^O与PVY^N的重组体，属于PVY^N∶O株系，S2-12属于PVY^O株系。本研究表明新疆加工番茄上的PVY主要为PVY^N∶O和PVY^O株系。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  西瓜噬酸菌Aac-5AAA ATPases基因moxR和ruvB功能研究

  李晶，杨玉文，赵廷昌

  植物病理学报. 2016, 46(6): 748-758. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.004

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  AAA ATPases(ATPase associated with diverse cellular activities)是一种与细胞活性相关的酶，广泛存在于所有生物中，同时具有蛋白酶和分子伴侣活性。为了研究AAA ATPases相关基因缺失对西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)的影响，本研究通过同源重组双交换的方法构建西瓜噬酸菌moxR基因以及ruvB基因全缺失突变菌株及互补菌株，测定了突变菌株的致病性、烟草过敏反应、运动性、生长能力、生物膜形成等;并利用实时荧光定量PCR方法测定了AAA ATPases与Ⅲ型分泌系统相关基因(hrcN和hrpE)、毒性蛋白相关基因(trbC和virB)、鞭毛相关基因(fliR和fliM)、菌毛相关基因(pinC-1和pinC-2)以及AAA ATPases亚家族RuvB相关基因(ruvA和ruvC)的关系。结果表明，moxR基因以及ruvB基因全缺失突变菌株的致病力降低、运动性减弱、生长能力下降、生物膜形成能力增强、烟草过敏性反应减弱、突变菌株中重要的致病基因hrcN和hrpE表达量显著下调，表明AAA ATPases相关基因moxR、ruvB在西瓜噬酸菌的致病力上发挥重要作用。
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  TMV侵染烟草诱导寄主产生细胞自噬

  刘伟，李方方，孙航军，王耀锋，余广宏，王凤龙，钱玉梅，杨金广

  植物病理学报. 2016, 46(6): 759-766. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.005

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  细胞自噬(autophagy)—自体吞噬，是真核生物中一种高度保守并普遍存在的物质循环利用过程。为明确烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)侵染烟草是否引起细胞自噬，本研究利用TMV-U1和普通烟(Nicotiana tabacum cv. Blight yellow)为主要研究材料，利用透射电子显微镜观察、单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色技术、自噬标记分子ATG8f-ECFP荧光观察和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分别检测TMV侵染烟草后的烟草细胞内自噬结构的形成、酸性细胞器的存在和细胞自噬相关基因(Autophagy related gene，ATG)ATG3、ATG4、ATG5、ATG6、ATG7、ATG8a、ATG18a的表达特征。结果表明，TMV侵染72 h后，在液泡边际和液泡内发现大量疑似自噬体结构。利用MDC荧光染色和ATG8f-ECFP瞬时表达技术，通过激光共聚焦显微镜观察，在TMV侵染72 h后发现点状荧光信号。TMV侵染48 h后，除ATG5外，烟草ATG3、ATG4、ATG6、ATG7、ATG8a、ATG18a表达均上调并在72 h达到顶峰。表明TMV侵染后感病烟草均可检测到细胞自噬现象，推测TMV侵染普通烟可诱导寄主产生细胞自噬反应。
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  番茄抗病毒基因Tm-2²及其等位基因tm-2氨基酸差异分析

  刘丹，陈天元，刘玉乐

  植物病理学报. 2016, 46(6): 767-774. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.006

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  番茄抗病蛋白Tm-2²与其等位感病蛋白tm-2在序列上相对保守但也有一定的差异性，研究这些差异对于了解Tm-2²抗病蛋白的结构和功能起着重要作用。本研究构建了不同的Tm-2²/tm-2置换突变体，在本生烟草上利用农杆菌注射法共表达突变体及其效应因子MP或TMV-GFP载体。通过对植物坏死表型以及病毒量变化的观察，发现当Tm-2² ARC结构域中RNBS-D保守基序中的第413位甘氨酸突变成tm-2中的丝氨酸后，Tm-2²介导的对烟草花叶病毒属病毒的抗性减弱。这说明RNBS-D保守基序对于Tm-2²行使其抗病功能是至关重要的。
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  甘蔗花叶病毒福州分离物全基因组克隆及种群分析

  邓宇晴，杨永庆，翟玉山，程光远，彭磊，郑艳茹，林彦铨，徐景升

  植物病理学报. 2016, 46(6): 775-782. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.007

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  为丰富甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus，SCMV)种群信息，探索SCMV种群结构，本研究运用RT-PCR方法克隆了采自福州的2个SCMV分离物(分别命名为 FZ-C1和FZ-C2)的全基因组，结合已公布的18个SCMV分离物的全基因组序列，利用MEGA 4.1和Simplot软件对SCMV的种群结构进行了分析。结果显示，FZ-C1和FZ-C2全长分别为9 570 nt和9 573 nt，均包含一个9 189 nt的开放阅读框，编码长度为3 063个氨基酸的多聚蛋白。这2个分离物与SCMV-A株系的相似性最高，酶切位点也与SCMV-A株系的基本一致。系统发育进化分析表明，SCMV可以分为3组，分别命名为SSGⅠ、Ⅱ、Ⅲ。SSGⅠ来源于玉米(Zea mays)，SSGⅡ和SSGⅢ来源于甘蔗(Saccharum spp. hybrid)，其中SSGⅢ主要来源于果蔗。FZ分离物聚在SSGⅡ组内。研究结果丰富了SCMV全基因组序列信息，有助于全面了解SCMV种群的遗传进化关系。
致病性与抗病性遗传
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  远缘杂交衍生后代中筛选小麦抗条锈病新抗源

  王浩庭，穆京妹，王琪琳，吴建辉，曾庆东，黄丽丽，康振生，韩德俊

  植物病理学报. 2016, 46(6): 783-790. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.008

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  针对小麦远缘杂交的一系列衍生系，在陕西杨凌人工条锈病圃(CYR32和CYR33混合小种)选择压力下，兼顾抗病性与农艺性状，经过连续6年系统选择，筛选了106份远缘杂交衍生后代选系。在此基础上，通过杨凌人工混合小种接种鉴定圃和甘肃天水自然诱发鉴定圃，对其进行成株期抗条锈病鉴定;利用当前流行小种CYR32、CYR33和G22-9进行苗期分小种鉴定;结合Yr26的分子标记检测评估抗源价值。建立基于成株期与苗期抗病性鉴定相结合，异地抗病表型鉴定与分子标记筛查的抗源筛选和评价体系。结果表明:106份远缘杂交后代衍生系中，筛选出54个能够抵抗包括G22-9在内的多个流行小种的选系;结合标记筛查结果，筛选到36份不含Yr26的抗病材料，其中4份为全生育期抗条锈病性类型(ASR)，32份为成株期抗性(APR)类型。推测这些抗性选系可能具有抗条锈病新基因。
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  本氏烟NbWRKY40亚家族转录因子抗病相关功能研究

  马丽娜，张雄，窦道龙，柴春月

  植物病理学报. 2016, 46(6): 791-802. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.009

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  植物WRKY类转录因子的IIa亚类广泛参与调控植物的生物胁迫和非生物胁迫过程。本研究根据拟南芥和普通烟中具有抗病和抗胁迫功能的IIa亚类WRKY40转录因子的序列，利用基因同源克隆法，获得本氏烟中NbWRKY40基因。序列分析表明在本氏烟中有5个属于IIa亚类的基因，其序列之间具有高度相似性。qRT-PCR检测发现NbWRKY40基因是受寄生疫霉侵染诱导上调表达的基因，通过VIGS技术研究该类基因在本氏烟中的抗病相关功能，用半活体营养型寄生疫霉进行抗病性试验，结果表明NbWRKY40基因的沉默降低了本氏烟对寄生疫霉的抗性，且在侵染点的细胞坏死程度增强，过氧化氢积累和胼胝质沉积都明显减少。NbWRKY40基因沉默同样降低了本氏烟对死体营养型灰霉菌的抗性。检测NbWRKY40基因沉默后4个不同抗病信号通路下游基因的表达，发现基因沉默导致参与抗病和SA途径的PR1b、PR2b基因受疫霉侵染诱导表达的水平明显下降。综上，推测NbWRKY40基因可能依靠SA介导的信号通路参与调控本氏烟抗病性。
流行学与生态学
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  鄂西北地区小麦条锈菌主要流行小种的寄生适合度研究

  薛楠，王峭，樊玉，杨立军，黄朝炎，李高宝，李强，王保通

  植物病理学报. 2016, 46(6): 803-808. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.010

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  为准确预测条锈菌流行小种在鄂西北地区的变异动态，本研究采用抗性组分法测定了CYR32、CYR33对当地主栽品种的寄生适合度。结果表明:决定鄂西北小麦条锈菌最重要的寄生适合度组分依次为条锈菌的侵染能力、扩展能力和产孢能力;建立了小麦条锈菌寄生适合度属性3个主成份的数学模型;从总体结果看CYR32、CYR33均表现较高相对寄生适合度，且CYR32略高于CYR33，但相比感病对照品种和外来品种，供试小种对当地主栽品种鄂麦352和襄麦55表现出较低的寄生适合度。
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  源自陕、甘野生小檗的小麦条锈菌有性生殖后代的毒性分析

  李巧，覃剑锋，赵元元，赵杰，黄丽丽，康振生

  植物病理学报. 2016, 46(6): 809-820. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.011

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  小麦条锈病是我国最具毁灭性的小麦病害之一，其流行常常造成小麦严重减产。种植抗病品种是防治该病害最经济、有效和环保的措施。但是，由于新毒性菌系的出现，抗病品种在种植短短数年内便“丧失”其抗病性。研究证实病原菌毒性变异产生新菌系是导致小麦品种抗病性“丧失”的根本原因。近年来，随着小麦条锈菌转主寄主小檗的确定，发现自然条件下我国小麦条锈菌在野生小檗上可以完成有性生殖。本研究通过对2015年自然发病小檗小麦条锈菌的分离及其单夏孢子堆纯化，利用中国鉴别寄主进行了毒性测定分析。从陕西、甘肃两省的3种感病小檗共分离获得小麦条锈菌菌系8个，其中有1个菌系与已知小种Su11-126的毒性完全匹配，其余7个为新菌系;93个单夏孢子堆群体可分为47个不同的致病类型，包括14个已知小种类型，33个新小种类型;有56个菌系与已知小种的毒性完全匹配，37个为新小种。本研究再次获得了条锈菌自然条件下存在有性生殖并因此导致新菌系产生的证据，证实了野生小檗在我国小麦条锈菌的生活史和病害循环中具有作用。
植物病害及其防治
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  抗黄瓜枯萎病丛枝菌根真菌与根围促生细菌组合菌剂的筛选

  刘东岳，李敏，孙文献，刘润进

  植物病理学报. 2016, 46(6): 821-832. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.012

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  丛枝菌根真菌(AMF)和植物根围促生细菌(PGPR)同时接种具有促生防病的作用。本试验旨在评价AMF与PGPR组合菌剂防治黄瓜枯萎病(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum )的效果，以获得高效生防菌剂。于温室盆栽条件下将AMF Funneliformis mosseae(Fm)、Glomus intraradices(Gi)和 Glomus versiforme(Gv)与PGPR菌株(PR2-1、PS1-3、PS1-5、PS2-6和PS3-2)不同组合菌剂处理黄瓜(Cucumis sativus， 品种:香翠16号)，测定各处理对黄瓜植株生长量、枯萎病防治效果和黄瓜产量的影响。供试AMF+PGPR各组合菌剂处理能不同程度的增加黄瓜根系AMF侵染率和根围细菌的定殖数量、促进黄瓜生长发育和降低枯萎病危害程度。其中，以Fm+PS3-2和 Gv+PS2-6组合菌剂促生和增产效果最好， 以Fm+PS1-5、Fm+PS3-2和Gv+PS2-6组合菌剂防治枯萎病效果最好。综合评价筛选获得高效组合为Fm+PS3-2和Gv+PS2-6。这两个处理可使黄瓜枯萎病病情指数分别下降50.0%和58.4%，防效达到54.5%和63.7%，具有一定的田间应用潜力。
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  红灰链霉菌HDZ-9-47对番茄生长及其防御酶的影响

  金娜，卢修亮，文洋，刘倩，简恒

  植物病理学报. 2016, 46(6): 833-840. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.013

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  红灰链霉菌Streptomyces rubrogriseus HDZ-9-47分离自根结线虫的卵，它既可寄生南方根结线虫，又可产生具杀线虫活性的代谢产物。本研究通过田间试验评价了HDZ-9-47发酵液对南方根结线虫的防治效果，以及对番茄产量和品质的影响;并测定了施用HDZ-9-47对番茄根部几种防御酶的影响。结果表明，在番茄移栽90 d后，穴施HDZ-9-47发酵液处理的防效达61.5%，并且促进番茄增产17.9%，增加了番茄果实中可溶性糖的含量，但对番茄茎粗无显著影响。此外，施用HDZ-9-47发酵液可提高番茄根部多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性，进而诱导番茄产生抗性。
研究简报
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  荸荠茎点霉秆枯病菌侵染过程的超微观察

  赵玳琳，陈威，黄俊斌，刘浩，陶刚，郑露

  植物病理学报. 2016, 46(6): 841-845. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.014

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  融合海肾荧光素酶的重组病毒在移码和通读研究中的应用初探

  于成明，王国鲁，王德亚，师科荣，原雪峰

  植物病理学报. 2016, 46(6): 846-849. https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.2016.06.015

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