2008年, 第38卷, 第1期　刊出日期：2008-02-10

  

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病原学
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  利用PCR技术专化性检测水稻细菌性条斑病菌

  张华, 姜英华, 胡白石, 刘凤权, 许志刚

  植物病理学报. 2008, 38(1): 1-5.

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  设计水稻细菌性条斑病菌的专化性引物,并建立相应的PCR检测体系,分别对31株水稻细菌性条斑病菌和15株水稻白叶枯病菌及其它相关菌株进行了测试。结果表明,建立的PCR检测体系可专化性检测水稻细菌性条斑病菌,而水稻白叶枯病菌和其它菌株均没有扩增信号。检测灵敏度可以达到20个细菌菌体,从自然发病和人工接种发病的水稻种子成功地检测出条斑病菌。实现了对水稻细菌性条斑病菌的快速和专化性检测。
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  玉米弯孢叶斑病菌致病类型分化研究

  薛春生, 肖淑芹, 翟羽红, 高颖, 高增贵, 陈捷

  植物病理学报. 2008, 38(1): 6-12.

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  利用鉴别寄主和同工酶技术,对采自黑龙江、吉林、辽宁和河北4省玉米弯孢叶斑病菌菌株的致病类型进行分析。研究表明,鉴别寄主技术将26个菌株的致病类型划分为4种类型,其中强和中等致病类型主要分布在辽宁省瓦房店市、吉林省公主岭市和河北省保定市。玉米弯孢叶斑病菌在酯酶、苹果酸脱氢酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶同工酶谱存在差异,不同菌株间的某些同工酶谱带数差异显著。
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  马蹄金褐色叶斑病的症状及核腔菌属一新种

  黄云, 方芳, 龚国淑, 秦芸

  植物病理学报. 2008, 38(1): 13-16.

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  褐色叶斑病是草坪草旋花科马蹄金属马蹄金上一新的重要病害。2005年,该病在四川雅安的病叶率90%,造成马蹄金草坪早衰和枯死。描述了马蹄金褐色叶斑病的马蹄金核腔菌新种(Pyrenophora dichondrae sp.nov.):假囊壳(278~374)μm×(105~144)μm,子囊(152~189)μm×(43~54)μm,子囊孢子横隔膜4~5个,纵隔膜2~3个,(36~52)μm×(10~23)μm。模式标本保存于四川农业大学植物保护系(MLSAU)。
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  广西水稻上嗜水小核菌的鉴定及系统发育研究

  胡春锦, 魏源文, 黄思良, 李杨瑞

  植物病理学报. 2008, 38(1): 17-23.

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  从类似纹枯病的水稻病株上分离到一种在菌核形态上与纹枯病菌(Rhizoctonia solani)有明显差异的真菌,致病性测定结果表明该菌能侵染水稻、玉米和大豆。对该菌的显微形态、生物学特性以及核糖体DNA-ITS序列进行研究,结果表明该菌为嗜水小核菌(Sclerotium hydrophilum Sacc.)。病菌在30℃、pH为6~9条件下生长表现最佳,属硫胺素自养型菌;营养菌丝与立枯丝核菌相似,菌核球形或椭圆形,数量极多,其平均大小仅为386.4μm×420.7μm;该菌的核糖体DNA-ITS序列与GenBank中唯一一个嗜水小核菌(登录号为DQ875597)的同源性为99.5%,并且与大多数丝核菌(Rhizoctonia spp.)也有一定的同源性,病菌的28S rDNA-RFLP分析结果进一步说明了该菌在系统发育上与丝核菌类真菌具有较高的同源性。通过比较该菌和几种与水稻纹枯病相关丝核菌核糖体DNA-ITS序列的差异,设计了一对特异性引物PS-1和PS-2,能专一地从被该菌侵染的水稻感病组织中扩增出一段约550bp的DNA。
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  应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒

  刘红光, 王中康, 曹月青, 夏玉先, 殷幼平

  植物病理学报. 2008, 38(1): 24-30.

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  根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。
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  从云南蝴蝶兰上检测到番茄斑萎病毒属病毒

  程晓非, 董家红, 方琦, 李婷婷, 丁铭, 张仲凯

  植物病理学报. 2008, 38(1): 31-34.

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  应用电镜观察、DAS-ELISA以及RT-PCR检测,从症状表现黄化、环斑的云南蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病样中分离得到的一个病毒分离物Tospo-Pha。该分离物粒子近球形、具包膜、直径约90nm,与番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mosaic virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)复合抗血清呈强阳性反应,分子检测发现该分离物SRNA5'末端序列与CaCV大岩桐分离物(CaCV-Gloxinia)同源性最高(91.0%),在系统进化树中与CaCV聚于同一分支。上述结果表明,从云南蝴蝶兰中分离到的Tospo-Pha属于Tospovirus病毒。
细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
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  一个编码推定的钙依赖磷酸酶催化亚基的番茄全长cDNA序列的克隆及其表达分析

  张志新, 徐幼平, 曹文渊, 蔡新忠

  植物病理学报. 2008, 38(1): 35-43.

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  钙依赖磷酸酶(Calcineurin)作为Ca²⁺信号传感器中继因子对受Ca²⁺调节的生物学过程起重要调控作用。本研究克隆了一个番茄全长cDNA序列,该序列与钙依赖磷酸酶催化亚基(Calcineurin A,CNA)序列同源。推定的蛋白产物由315个氨基酸组成,明显短于非植物来源的该类蛋白。该蛋白含有钙依赖磷酸酶类金属磷酸酶中保守的催化作用活性位点基序,以及两个潜在的钙调蛋白结合位点,故暂时命名为LeCAL1(Lycopersicon esculentum calcineurin A like 1)。对CNA序列的分析结果表明,植物与非植物CNA差异明显,在系统进化树中形成距离很远的两大分支。植物CNA中,LeCAL1与拟南芥CNA同源性较高,而与水稻CNA较低。对LeCAL1在番茄中的表达分析结果显示,Cf/Avr介导的过敏性反应的产生诱导LeCAL1基因的表达,表明钙依赖磷酸酶可能在番茄抗叶霉病中起调节作用。
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  黑松13个抗病家系对松材线虫的抗性反应及组织病理学观察

  吴小芹, 张艺, 陈蔚诗, 刘劼, 叶建仁

  植物病理学报. 2008, 38(1): 44-50.

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  为评估自日本引进的抗性黑松对松材线虫(Pine Wood Nematode,PWN)的抗病性,选用3个不同来源的PWN强毒和中强毒虫株采用皮接法接种,对1.5年生的黑松13个优良家系进行抗病性测定。结果表明,引进的黑松大部分家系对3个PWN虫株都表现出一定的抗病性,但针对不同虫株,抗病各家系间差异明显,其中有7个家系(3、4、5、6、9、11和12号)表现良好。同时,为探讨引进黑松家系感染PWN后的组织病理反应,对12号抗性家系进行组织病理学研究。观察表明,松材线虫在抗性黑松和普通黑松中的纵向扩散速度差别不明显,但其在抗性黑松内的横向扩散速度比在普通黑松内要慢,且抗性黑松体内木射线细胞和围绕树脂道泌脂细胞的薄壁细胞,出现病变要比普通黑松晚;在接种后同一时间取茎段的同一部位发现,抗性松苗组织解剖结构及细胞的病变和破坏程度要比普通松苗轻。
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  低温对黄瓜花叶病毒CMV-BG株系2b基因多态性的影响

  张兴桃, 温国蕾, 王晓丹, 赵爽, 庄木, 李艳红

  植物病理学报. 2008, 38(1): 51-57.

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  本文将黄瓜花叶病毒CMV-BG株系侵染普通烟草的不同单株后,放在不同温度下培养,30d后对接种植株症状进行对比观察,并对2b基因表达进行了检测及其序列测定分析。结果表明:被CMV-BG株系侵染的植株在低温条件下,植株新生的大部分叶片严重畸形,而CMV-BG株系2b基因的表达与不同温度条件没有相关性;CMV2b基因序列与源分离物CMV-BG序列相比发生了较明显的变异,它们作为一组序列与分离物SF/GF/SY等的相似性甚至高于源BG序列;此外,尽管来自2组植物中的病毒序列变化均未表现正选择(positive selection),但来自低温培养的侵染植株的2b基因的多态性明显高于常温条件培养的植株,发生非同义突变的位点数目也高于同义突变的位点数目。因此认为,低温有助于加强CMV-BG株系2b基因的多态性。
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  高温激活RNA沉默介导的心叶烟抗病毒防御反应

  孙燕霞, 张献军, 刘兰伟, 刘秀君, 刘红梅

  植物病理学报. 2008, 38(1): 58-63.

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  在真核细胞内,RNA沉默是一种保守的抵抗病毒及外源基因等寄生分子的防御机制。温度可以明显地影响植物体与病毒之间的相互作用。在常温状态下,常常会伴随病毒病的爆发,但在较高温度下,症状则会减轻,甚至有些感病植株新生叶片可以较快地恢复健康。目前这类现象的内在机制还不完全清楚。本文通过定量分析不同温度下马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染的心叶烟(Nicotiana glutinosa)植株体内病毒蛋白含量,结合症状观察,确定30℃左右是PVX和PVY在心叶烟上引起症状消失即发生系统性RNA沉默的临界温度,此时的感病植株上部新生展开叶片呈现无症状态,下部已发病叶片症状不变。在常温时,由病毒激发的RNA沉默会受到抑制,病毒来源的小分子干涉RNA (small interfering RNAs,siRNAs)含量极少或根本检测不到,植株对于病毒的敏感性较强。当温度达到30或32℃时,感病植株下部症状保持叶片中,病毒起源的siRNAs含量明显增加,而上部新生健康叶片中却检测不到siRNAs的存在。这说明高温激活了RNA沉默介导的植物抗病毒防御反应,导致病毒症状减轻甚至消失。
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  南瓜蚜传黄化病毒湖北和云南分离物的部分序列分析

  尚巧霞, 向海英, 韩成贵, 李大伟, 于嘉林

  植物病理学报. 2008, 38(1): 64-68.

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  本研究从带有黄化症状的南瓜叶片中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增得到来自湖北和云南的南瓜蚜传黄化病毒(CABYV)2个分离物的1375nt特异性核苷酸片段。分别将PCR产物插入到克隆载体pMD19-T并转化大肠杆菌DH5α,对筛选到的阳性克隆进行了序列测定和分析(GenBank登录号为EF488996和EF488997)。所获片段含有部分复制酶基因576nt,非编码区199nt和完整的CP基因600nt,编码一个由199个氨基酸组成的分子量约为22kDa的结构蛋白。湖北和云南分离物与法国分离物、意大利分离物、西班牙分离物、北京分离物和上海分离物的CP基因核苷酸序列和推测氨基酸序列的同源性分别为93.1%~98.5%和91.4%~98.5%。
致病性与抗病性遗传
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  来自簇毛麦抗条锈病新基因的SSR标记

  周新力, 吴会杰, 张如佳, 刘佩, 井金学

  植物病理学报. 2008, 38(1): 69-74.

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  用小麦条锈菌条中30号生理小种,对小麦抗病种质小麦-簇毛麦易位系V9128-1和铭贤169的杂交后代进行抗条锈性遗传分析,小麦-簇毛麦易位系V9128-1的抗病性符合1对显性抗条锈病基因控制。并根据F₂抗、感病单株分离比例组建抗感池,用SSR技术寻找与抗病基因连锁的分子标记。从121个SSR引物组合中筛选到2个与抗病基因YrV1(暂命名)紧密连锁的微卫星标记Xgwm566和Xgwm376,遗传距离分别为3.6和5.5cM;因此,该抗条锈病基因位于小麦3B染色体短臂上。这2个标记不仅能在小麦-簇毛麦易位系V9128-1中检测到,而且在抗病基因供体亲本簇毛麦中也能检测到。综合抗病基因来源和分子生物学试验结果,可以推断,YrV1很可能是1个来自簇毛麦并与已知抗条锈病基因不同的新基因。
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  大豆品种(系)抗疫霉根腐病基因的连锁SSR标记分析

  陈晓玲, 朱振东, 杜青, 王晓鸣, 肖炎农, 武小菲

  植物病理学报. 2008, 38(1): 75-82.

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  大豆疫霉根腐病是大豆破坏性病害之一。利用抗病品种是防治该病的唯一有效的方法。迄今,已经鉴定了15个抗大豆疫霉根腐病基因(Rps基因),而且大豆部分基因都获得了不同类型的分子标记。本研究根据以前抗病基因推导结果选择26个可能含有Rps1基因座位等位基因或(和)Rps4基因的大豆品种(系),利用分别与Rps1a和Rps4紧密连锁的SSR标记进行抗病基因的分子检测,通过比较含有已知抗病基因对照大豆品种(系)分子标记检测结果并综合以往基因推导结果推断检测品种(系)的Rps基因。在选择的26个品种(系)中,长农14号被证明含有Rps1a,周豆13和铁95068-5含有Rps1a与Rps4基因组合,品系50794、科8924-3和合豆1号含有Rps4;有11个品种(系)存在含有Rps1a的证据、品系50052被推断含有Rps1c与Rps3b基因组合,但不排除这些品种(系)在Rps1座位含有一个新等位基因的可能性。另外,有7个品种(系)的所含抗病基因不能确定,它们可能含有新的Rps基因。
流行学与生态学
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  渭北旱塬苹果黑星病的初侵染来源

  胡小平, 杨家荣, 田雪亮, 杨之为

  植物病理学报. 2008, 38(1): 83-87.

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  苹果黑星病是世界各苹果产区的重要病害之一,也是我国渭北旱塬苹果产区的新病害。近5年调查研究证明,渭北旱塬苹果落叶上分生孢子数量随时间推移呈急剧下降趋势,在春季苹果芽鳞萌动之前,分生孢子呈无色透明薄片状,均已失去存活力,芽鳞内外检测到分生孢子的数量很少,且均已丧失萌发力。果园中孢子捕捉结果表明,子囊孢子出现在先,分生孢子在后,两者出现时间相差15d以上,且捕捉到分生孢子的日期是在黑星病发病以后。对洛川县、白水县、长武县、永寿县、泾川县和平凉市等地苹果黑星病普查中未发现发病枝条,以菌丝体在枝条上越冬的可能性极小。综合以上试验结果,初步确定子囊孢子是渭北旱塬苹果黑星病的初侵来染,分生孢子不能越冬。
植物病害及其防治
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  禾谷丝核菌拮抗细菌的鉴定及其拮抗产物分析

  陈丽华, 张爱香, 朱韬, 赖志兵, 王宗华, 陈怀谷

  植物病理学报. 2008, 38(1): 88-95.

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  小麦纹枯病是长江中下游麦区重要的土传病害。明确小麦根际拮抗细菌种类和拮抗机理对小麦纹枯病生物防治具有重要意义。从江苏省姜堰市小麦根际分离到拮抗细菌A6、A12、B37、B40、B41和B42。通过生理生化测定和16SrDNA同源序列比对分析,这些菌株都为荧光假单胞杆菌。在温室条件下进行种子处理,这些菌株对小麦纹枯菌都有一定的控制作用,其中菌株A6、B41和B42的控病作用明显,菌株B42对小麦纹枯病的控制效果最好,温室防效达71.67%。基因检测和次生代谢物分析的结果表明:6个菌株都不产生2,4-二乙酰基间苯三酚和吩嗪,菌株A12、B37和B42含有与吡咯菌素合成相关的基因PrnD,在菌株B37中还检测到合成基因PrnC;菌株A12、B37和B42产生嗜铁素;除了菌株A6和B37,其余菌株都产生蛋白酶;所有菌株都不产生几丁质酶。
研究简报
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  草莓轻型黄边病毒3'末端序列多态性研究

  杨洪一, 代红艳, 李丽丽, 张志宏

  植物病理学报. 2008, 38(1): 96-99.

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  The 930 bp segment in 3' terminal region of Strawberry mild yellow edge virus(SMYEV) genome was amplified by 3' rapid amplification of cDNA ends(RACE).Ten Chinese isolates were sequenced,and 7 of them were the same.Nucleotide and amino acid identities and phylogenesis were analyzed between Chinese isolates and 24 isolates from other regions of the world.Sequence analysis of the 878 nt stretch within 3' terminal region of SMYEV genome showed that nucleotide acid identities ranged from 79.5% to 100%,deduced amino acid sequences of coat protein gene identity were 86.4% to 100%.Phylogenetic analysis showed that all isolates of SMYEV fell into four clades.To a certain extent,the clades were related with the geological distribution of SMYEV.Chinese isolates SY01 and SY04 lay in the same clade with European and American isolates,but formed a small separate branch.Isolates SY03 and SY02,derived from Fragaria×ananassa cv.Changhong-2 and F.pentaphylla respectively,had a far relationship with other isolates and fell into one clade.They were likely to be the special isolates that existed only in China.
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  低钾逆境下根结线虫感染所诱导的番茄根巨型细胞的组织病理学反应

  袁林, 方文珍, 罗大民

  植物病理学报. 2008, 38(1): 100-103.

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  Comparison of histopathological response and quantitative measurement of giant cell(GC) induced by Meloidogyne javanica in tomato root were studied under potassium-deficient(0.2 mmol/L K⁺) and replete conditions(control,6.0 mmol/L K⁺).K⁺-deficient stress did not impede the formation and maintenance of GC.The mean number of GC per feeding site as well as the mean diameter of GC did not differ between the treatments.However,the thickness of cell wall including components resulted from the accumulated polysaccharide and the length of cell-wall ingrowth increased 5-25 d after inoculation in K⁺-deficient as compared with K⁺-replete conditions.An increase of cell-wall ingrowth suggested a kind of compensational response to the potassium stress.
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  普通小麦-华山新麦草易位系H9020-1-6-8-3抗条锈病基因的遗传分析和SSR标记

  刘佩, 杨敏娜, 周新力, 吴会杰, 井金学

  植物病理学报. 2008, 38(1): 104-107.

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  It have proved that wheat translocation line H9020-1-6-8-3 derived from Psathyrostachys huashanica Keng is an important resistant resource to stripe rust.To confirm the existence of resistant genes,it was crossed with susceptible cultivar MingXian 169 as male and female parent,respectively.Seedlings of parents and F₂ progeny were tested for resistance to selected CY29 of races of Puccinia striiformis f.sp.tritici from China.H9020-1-6-8-3 had one dominant resistant gene which temporarily named YrHs,whatever it was male or female parent.By using BSA method,two markers,Xgwm261 and Xgwm455 located on 2DL were found.The distance to YrHs were 4.3 and 5.8 cM respectively.The result could be used in molecular-assisted breeding.
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  稻瘟病菌激发子诱导非寄主植物的抗病效果

  李金波, 纪春艳, 王振中

  植物病理学报. 2008, 38(1): 108-112.

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  Hyphal cell wall crude elicitor(CWE)of rice blast pathogen could induce hypersensitive response in tobacco and induce other nonhost plants to be resistant to other fungal pathogens.When corn was treated with CWE,they inhibited the infection of Exserohilum turcicum and Curvularia lunata,and when plants of capsicum and cucumber were treated with CWE,they inhibited the infection of Colletotrichum gloeospori-oides.CWE solution showed no bioactivity on spore germination and hyphal growth of the experiment fungi in vitro.Nonhost resistance induced by CWE to other fungal pathogens was not complete resistance.The induced resistant effect(IRE) increased as CWE concentration increased,however,IRE had somehow satura-ted concentration of CWE.Induced nonhost resistance by incompatible pathogen was quantitative to other compatible pathogens.The induced resistance was best at 2 or 3 d after CWE treatment,and then decreased.IRE was about 20 percent in 10 d after CWE treatment.